cGMP系の血管平滑筋細胞分化決定における新しい意義に関する分子医学的研究

cGMP系统决定血管平滑肌细胞分化新意义的分子医学研究

基本信息

批准号：
09281219
负责人：
伊藤裕
金额：
$ 1.15万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

これまで我々は、ナトリウム利尿ペプチドがcGMP系を活性化しvascular growthに対して抑制的に作用することを明らかにした。更に、ナトリウム利尿ペプチドの一つであるCNPが血管内皮細胞において生合成されることを明らかにし、CNPがNOと並ぶペプチド性のEDRFであることを証明し、“血管壁ナトリウム利尿ペプチド系"という概念を提唱した。最近、CNP遺伝子組み換えアデノウイルスを構築し、培養血管平滑筋細胞にCNP遺伝子を導入し過剰発現させることでcGMP系を活性化すると、増殖がGl期で停止するとともに、再分化が生ずるという新しいcGMP系の作用を報告した。更に、心血管系特異的ホメオボックス遺伝子であるGaxがcGMP系の活性化によりその遺伝子発現が亢進することも報告し、cGMP系において転写因子Gaxという新しいシグナル伝達経路が存在する可能性を提示した。本年度は、cGMPカスケードにおいてcGMP産生よりGax発現亢進に至るシグナル伝達経路を明らかにするため、我々が既にクローニングに成功したヒトcGMP依存性プロティンキナーゼ(Gキナーゼ)タイプIαについて検討した。すなわち、GキナーゼのN端部の二重化ドメイン、cGMP結合ドメインを欠失させたミュータントを作成し、βアクチンプロモーター、サイトメガロウィルスエンハンサーを有する発現ベクターを構築した。Gキナーゼ特異的基質を用いたin vitroのGキナーゼkination assayを確立し、このミュータントGキナーゼがcGMPを必要としない持続活性型constitutive activeであることを明らかにした。更に、このミュータントGキナーゼ発現ベクターを用い、培養血管平滑筋細胞の遊走、増殖が著明に抑制されることを明らかにし、cGMPカスケードによる血管平滑筋細胞のフェノタイプ決定におけるGキナーゼの関与を証明した。更に、CNP-cGMP-Gキナーゼ-Gaxに至る血管平滑筋分化決定におけるシグナル伝達経路においてcyclin/CDK complexの抑制因子であるp21^<CIPl>の関与を明らかにした。

迄今为止，我们已经透露，二二钠钠会激活CGMP系统并抑制脉管生长。此外，在血管内皮细胞中将钠的尿液肽之一CNP是生物合成，证明CNP是与NO一起使用的肽EDRF，并被称为“血管二尿素钠钠肽系统”。最近，如果构建了CNP遗传腺病毒并通过将CNP基因引入培养的血管平滑肌细胞来激活CGMP系统，并且CGMP系统将停止，并将在GL期间停止，并将其停止。将发生。此外，它还报道了GAX是一种特殊的家用盒子基因特异性机械管系统，由于CGMP系统的激活而增强了其基因表达，并提出了一种新的信号传输途径，称为CGMP中的传输因子GAX系统存在。在这个财政年度，检查了CGMP级联对人类CGMP依赖性的生物激酶（G激酶）Iα型的cGMP级联，该级别已经成功克隆，以阐明从CGMP产生的信号传输途径以增加GAX表达。换句话说，我们创建了一个突变体，该突变体已被G激酶的N端的重复域，CGMP结合结构域删除，并构建了具有β -Actin pro运动的表达矢量和一个位点Megalo病毒增强子。使用G-激酶特异性底物建立了体外的G Kination分析，表明该突变G激酶是一种连续的激进征兵Activy，不需要CGMP。此外，使用这种突变的G激酶表达载体，它揭示了培养的血管平滑肌细胞和增殖的迁移得到了明显抑制，并证明G-激酶在CGMP级联对血管平滑肌细胞的Fenatype测定中的迁移。此外，揭示了P21^<cipl>的参与，这是细胞周期蛋白/CDK复合物中的抑制因子，在血管平滑肌分化的信号传递途径中的CNP-CGMP-G激酶-gax的测定得出。