ヒトES細胞を用いた肥満脂肪組織内炎症に対する新規細胞形質変換治療法の開発

使用人类胚胎干细胞开发一种针对肥胖脂肪组织炎症的新型细胞转化疗法

基本信息

批准号：
18659266
负责人：
伊藤裕
金额：
$ 2.11万
依托单位：
Keio University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

我々が既に同定しているヒトES細胞由来血管前駆細胞(VPC)を用いて単球/マクロファージへの分化誘導を検討した。既報にてマウスES細胞にてマクロファージ分化誘導に有効であったと報告のあるSCF、GM-CSF、M-CSF、インターロイキン1α、インターロイキン3、インターロイキン6をヒトVPCに添加することでマクロファージへの分化誘導を試みたが、CD11b(+)CD45(+)細胞はごくわずか得られるのみであった。一方Embryoid Body(EB)を形成した後、上記サイトカインを添加したメチルセルロース培地での培養ではCD11b(+)CD45細胞が10%ほど存在していた。したがって今回使用したヒトES cell株(hES3)においては、マウスES細胞とは異なり、血管前駆細胞からのマクロファージ誘導にはさらなる誘導方法の工夫、feeder細胞の選択が必要であると考えられた。さらにヒトES細胞にてEBを経て得られたCD11b(+)CD45(+)cellsから脂肪細胞への分化誘導が可能であるかどうかを検討したが、脂肪滴を含んだ成熟脂肪細胞は得られなかった。また、メタボリックシンドロームの成因の一因と考えられる脂肪細胞・炎症細胞の相互作用の解析を目指し、ヒト脂肪組織内に存在する間葉系幹細胞の同定、解析を施行した。これまでに培ったヒトES細胞からの血管細胞、血球細胞分化誘導とそれら分化各段階の細胞の性状解析のノウハウに基づき、緻密なフローサイトメトリーによる解析を通じてヒト脂肪組織由来間葉系幹細胞(SVF-MSC)、ヒト脂肪組織由来血管前駆細胞(SVF-VPC)の同定に成功した。すなわちCD73(+)細胞群がCD34(±)CD45(-)CD105(-)CD166(+)という単一な細胞集団であることを証明し、CD73(-)細胞群からは脂肪・骨・軟骨細胞誘導が不可能であることを証明した。GPI anchored proteinとして知られるCD73はAMP→アデノシンへの変換を促進し、内皮細胞へのリンパ球の接着を促す事から、CD73(+)細胞がアデノシンを介して脂肪組織内での脂肪細胞と炎症細胞との相互作用に関与している可能性が考えられる。現在、アデノシンアゴニスト・アンタゴニストを使用してSVF-MSCにおけるアデノシンの作用機序を解析中である。

我们研究了使用我们已经鉴定的人 ES 细胞来源的血管祖细胞 (VPC) 诱导分化为单核细胞/巨噬细胞的情况。先前报道可有效诱导小鼠 ES 细胞中巨噬细胞分化的 SCF、GM-CSF、M-CSF、白细胞介素 1α、白细胞介素 3 和白细胞介素 6 可添加至人 VPC 中以诱导巨噬细胞分化。仅获得少量CD11b(+)CD45(+)细胞。另一方面，在形成胚状体(EB)后，当在补充有上述细胞因子的甲基纤维素培养基中培养时，存在约10％的CD11b(+)CD45细胞。因此，在此使用的人ES细胞系(hES3)中，与小鼠ES细胞不同，认为为了从血管祖细胞诱导巨噬细胞，需要进一步设计诱导方法和选择饲养细胞。此外，我们还研究了是否可以使用人ES细胞将通过EB获得的CD11b(+)CD45(+)细胞诱导分化为脂肪细胞，但没有获得含有脂滴的成熟脂肪细胞。此外，为了分析脂肪细胞和炎症细胞之间的相互作用（被认为是代谢综合征的原因之一），我们鉴定并分析了人类脂肪组织中存在的间充质干细胞。基于迄今为止从人 ES 细胞诱导血管细胞和血细胞分化并分析细胞在每个分化阶段的特性的技术，人脂肪组织来源的间充质干细胞 (SVF) 是 -MSC) 和成功鉴定出人脂肪组织来源的血管祖细胞（SVF-VPC）。也就是说，证明CD73(+)细胞群是CD34(±)CD45(-)CD105(-)CD166(+)的单细胞群，CD73(-)细胞群含有脂肪、骨，和软骨。已证明细胞诱导是不可能的。 CD73被称为GPI锚定蛋白，促进AMP转化为腺苷，促进淋巴细胞与内皮细胞的粘附，可能参与与细胞的相互作用。我们目前正在使用腺苷激动剂和拮抗剂分析腺苷在 SVF-MSC 中的作用机制。