分子シャペロンによる複製開始蛋白質(RepE)の二量体から単量体変換の分子機構

分子伴侣将复制起始蛋白（RepE）二聚体转化为单体的分子机制

基本信息

批准号：
09276210
负责人：
和田千恵子
金额：
$ 1.54万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

分子シャペロン(DnaK,DnaJ,GrpE)はストレス条件下で作られたunfolded protein をfoldingする働き等があり、これらに関する知見は多い。他方分子シャペロンは通常の条件で複製開始因子や転写因子の活性化や不活性化を助け、広い生物種にわたり機能蛋白質の調整因子として重要な働きをしている。しかしこれらの作用機構の詳細は明らかでない。大腸菌ミニFの複製開始因子(RepE)の系はこのモデル系として優れている。RepEの単量体は複製開始因子として機能し、二量体はRepE遺伝子の自己転写抑制因子として機能することを明らかにした(Proc Natl Acad Sci.1994)。RepEは通常二量体として安定に存在し、複製開始因子としては不活性状態である。二量体から単量体への変換はDnaK,DnaJ,GrpE,ATPによって行われることを明らかにした(論文作成中)。1997年度の研究計画(1)でRepE-分子シャペロン複合体形成に関する成果は以下である。分子シャペロンの変異体を用いてRepE-分子シャペロン複合体形成をAffinity Columnを用いて調べた結果、RepEとDnaK,DnaJ,GrpEが各々直接相互作用することが分かった。今後、他の方法を用いて、このことを確認するとともに、複合体の解離過程を明らかにする実験を計画している。一方でこの変換過程を分子レベルで理解するための基礎となるRepEの二量体形成ドメインを遺伝学、生化学的手法を用いて解析した結果、RepE(251 Residues)の中央領域が(93-161 Amino Acids)が二量体形成に必須であることが分かった(J.Mol.Biol.,1997,274,27-38)。この系ではRepEの二量体、単量体がともに生理的機能を持ち、それらの変換に分子シャペロンが関与しているという特徴を持つ。この系での詳細な解析の成果は生物種にひろく保存されている分子シャペロンがストレス応答だけではなく、正常な増殖においても機能しているがこれらに共通する普遍的な法則性があることが予想され、それを見いだせるのではないかと考えている。

分子cheperon（DNAK，DNAJ，GRPE）具有在应力条件下产生的折叠蛋白的功能，并且对此有很多知识。另一方面，分子分子雪花龙有助于在正常条件下激活和灭活重复因子和转录因子，并重要地作为功能蛋白在广泛的生物物种上的调节因子。但是这些动作机制的细节尚不清楚。大肠杆菌迷你F的重复因子（REPE）系统非常出色，就像该模型系统一样。已经揭示了repe的单体起重复的起始因子的作用，并且双体充当自我转录的抑制因子（Proc Natl Acad Sci.1994）。 repe通常以双体为稳定性而存在，并且是不活跃的，作为重复的起始因素。据揭示，DNAK，DNAJ，GRPE，ATP（创建论文）将从双重分子转换为单体。在1997年研究计划（1）中，有关重新分子分子复合形成的结果如下。使用使用亲和力柱的突变分子Cheperon络合物使用分子雪蛋糕突变体，发现Repe，DNAK，DNAJ和GRPE直接相互作用。将来，我们计划使用其他方法来确认这一点，并阐明复合体的解剖过程。另一方面，由于分析了repe的双体形成结构域，这是使用遗传学和生化方法，中央区域（93-）（93-）理解分子水平上这种转化过程的基础。（93-）。在该系统中，两倍的repe具有生理功能，并且分子伴侣参与了这些转化。该系统中详细分析的结果是，存储在生物物种中的分子cheperon不仅在压力反应中起作用，而且在正常生长中起作用，而且具有普遍的定律。我可以找到它。