PHF形成における脳cdc2様キナーゼの役割

脑CDC2样激酶在PHF形成中的作用

基本信息

批准号：
05261204
负责人：
久永眞市
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Tokyo Institute of Technology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-05261204/
关键词：
老人性痴呆症 PHF タウ cdc2キナーゼリン酸化ニューロフィラメント

项目摘要

Neurofilament-Hサブユニット(NF-H)のリン酸化部位を認識する抗体はPHFタウとも反応することから、NF-HとPHF-tauは同一キナーゼによってリン酸化されていると考えられる。NF-Hをリン酸化するキナーゼを同定、精製し、その性質を調べることにより、PHF形成の仕組みを明らかにすることができるのではないかと考えた。脱リン酸化型NFを基質に用いることにより、NF-Hキナーゼの特異的なアッセイ法が確立できた。この方法を用いてブタ脳抽出液中に存在するNF-Hキナーゼ活性を調べたところ、そのほとんどは微小管分画に回収された。NF-Hキナーゼを微小管分画から各種カラムを用いて精製した。精製NF-Hキナーゼは脳cdc2様キナーゼであるcdk5と同一であることが、cdk5に対する抗体を用いたブロッティングにより示された。NF-HキナーゼはNF-Hのin vivoのリン酸化部位をリン酸化していた。NF-Hキナーゼは正常脳内でtauを最もよくリン酸化しているキナーゼの一つであることが、NF-Hの特異的阻害剤であるbutyrolactone Iを用いた実験より示された。今後は、本キナーゼとPHF形成との関連をより直接的に示すため、神経の分化、老化に伴うキナーゼの発現と活性制御をcDNAや抗体を用いて調べるとともに、リン酸化tauによるPHF形成のin vitro実験系の確立を目指していく予定である。

识别神经丝 H 亚基 (NF-H) 磷酸化位点的抗体也会与 PHF-tau 发生反应，表明 NF-H 和 PHF-tau 被同一激酶磷酸化。我们认为，通过鉴定和纯化磷酸化 NF-H 的激酶并检查其特性，我们或许能够阐明 PHF 形成的机制。通过使用去磷酸化的 NF 作为底物，我们能够建立 NF-H 激酶的特异性测定方法。当我们使用这种方法研究猪脑提取物中存在的 NF-H 激酶活性时，大部分在微管部分中被回收。使用各种柱从微管级分中纯化 NF-H 激酶。通过用 CDK5 抗体进行印迹，纯化的 NF-H 激酶与 CDK5（一种脑 CDC2 样激酶）相同。 NF-H 激酶磷酸化 NF-H 的体内磷酸化位点。使用 NF-H 特异性抑制剂丁内酯 I 进行的实验表明，NF-H 激酶是正常大脑中最常磷酸化 tau 的激酶之一。今后，为了更直接地论证该激酶与PHF形成的关系，我们将利用cDNA和抗体来研究该激酶与神经分化和衰老相关的表达和活性调控，以及对PHF形成的抑制我们计划建立一个体外实验系统。