U6核内低分子RNAの触媒機構に関する研究

U6核小RNA催化机制研究

基本信息

批准号：
04272213
负责人：
谷時雄
金额：
$ 2.24万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1992
资助国家：
日本
起止时间：
1992 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

我々は、mRNA前駆体のスプライシング反応がU6snRNAによって触媒されている可能性を探るため、in vitroで合成したU6snRNAを用いて、5'スプライス部位を含む合成RNAの切断活性を種々の反応条件を用いて検討したが、U6snRNA単独では切断活性は検出されなかった。しかし、U6snRNAと(_-)sTRSVの触媒部位との間に構造的な類似性が見いだされたことから、これら2つのRNAのキメラRNAを作成してその活性を解析したところ、U6snRNAのヘアピン領域の数塩基が(_-)sTRSV型であれば基質RNAに対する切断活性が生じることが判明した。次に、スプライシング触媒活性にはU6snRANのみでなく、U6snRNAと他のsnRNAとの相互作用が必要である可能性を検討した。U6snRNA遺伝子に見いだされたmRNA型イントロンは、何らかのmRNA前駆体からスプライシング反応によって切り出されたイントロンが、逆にスプライシング反応の触媒部位に挿入され、そのcDNAがゲノム内に固定されて生じたという仮説が正しければ、U6snRNA以外に触媒部位を形成するsnRNAが存在する場合、それらのsnRNAの遺伝子にもmRNA型イントロンが生じる可能性がある。そこで、酵母R.hasegawaeにおいて、U6snRNA以外のsnRNAの遺伝子のmRNA型イントロンが存在するかを解析した。その結果、U2RNA遺伝子に60塩基からなる典型的なmRNA型のイントロンが存在していることが明らかになった。しかも、そのmRNA型イントロンが見いだされた位置は、U2snRNAの塩基配列中生物種間に於て極めて良く保存された領域に隣接していた。以上の結果は、U2snRNAがブランチ部位の認識だけでなく、U6snRNAと塩基対合することにより、スプライシング反応触媒部位の形成に深く関与している可能性を示唆する。

为了探索U6SNRNA催化mRNA前体的剪接反应的可能性，我们研究了使用体外合成的U6SNRNA的合成RNA的裂解活性，但没有单独检测到U6SNRNA的裂解活性。然而，在U6SNRNA和（_-）strsv的催化位点之间发现了结构相似性，并且在创建嵌合RNA并分析了它们的活性时，发现u6snRNA的发夹区域是A（_-）a（_-）strsv型，则产生了clavage rna的裂解活性。接下来，我们研究了U6SNRNA与其他SNRNA之间的相互作用不仅需要用于剪接催化活性的可能性。 If the hypothesis is correct that the mRNA-type introns found in the U6snRNA gene are that introns excised by a splicing reaction from some mRNA precursor were inserted into the catalytic site of the splicing reaction, and the cDNA was immobilized within the genome, then if there are snRNAs that form catalytic sites other than U6snRNAs, there is a possibility that mRNA-type introns will也可以在这些SNRNA的基因中产生。因此，我们分析了酵母hasegawae中u6snRNA以外的SnRNA基因的mRNA型内含子。结果，揭示了U2RNA基因具有由60个碱基组成的典型mRNA型内含子。此外，发现mRNA型内含子的位置与在U2SNRNA的基本序列中在物种中非常保守的区域相邻。以上结果表明，U2SNRNA可能通过识别分支位点的识别，而且还与U6SNRNA配对，可能深深地参与了剪接反应催化位点的形成。