mRNAの核外輸送機構に関する研究

mRNA核输出机制研究

基本信息

批准号：
11237206
负责人：
谷時雄
金额：
$ 41.28万
依托单位：
Kumamoto University (2001-2003)Kyushu University (1999-2000)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至 2003
项目状态：
已结题

项目摘要

1.分裂酵母のmRNA核外輸送温度感受性変異株ptr5とptr9の原因遺伝子をクローニングし、解析を行った。その結果、ptr5^+遺伝子がコードする蛋白質は核膜孔因子Nup85pの分裂酵母ホモログであることが示された。ptr5変異株では蛋白質の核内外輸送は正常であったことから、Ptr5pはmRNA核外輸送特異的に機能する核膜孔因子であることが示唆された。また、ptr9遺伝子は紡錘極体(SPB)形成に関与するSfilpと同一であった。ptr9変異株では、細胞形態の異常が観察されることから、細胞周期進行の制御とmRNA核外輸送機構との間に何らかの関連がある可能性が示唆された。2.ヒトの手足形成不全を伴う遺伝性疾患split hand/split foot病の原因遺伝子DSS1の分裂酵母相同遺伝子を欠失させると、mRNAの核外輸送に異常を示すことを昨年度までに明らかにした。今回新たにdss1欠失株のマルチコピーサプレッサーとして、プロテアソームの構成因子であるPadlpを同定した。この結果から、DSS1がプロテアソームを介して機能していることが判明した。3.蛍光標識したftz pre-mRNAをHeLa細胞核にマイクロインジェクションしたところ、蛍光pre-mRNAは核内でSC35のスペックルと共局在してスプライシングされた後に、細胞質へと核外輸送された。イントロンを含まないcDNA由来のmRNAに比較して、pre-mRNAの方が迅速に細胞質へと輸送され、スプライシング反応が核外輸送を促進することが示された。RT-PCRを用いて蛍光mRNAが細胞内で分解されていないこと、また、転写阻害によってmRNA核外輸送が阻害されること、その際輸送されなかった蛍光mRNAが核内の新規ドメインTIDRに蓄積することを明らかにした。本実験系は、唯一のmRNA核外輸送の可視化アッセイ系として今後有用であると思われる。

1。对裂变酵母的温度敏感突变体Ptr5和Ptr9的致病基因进行克隆和分析。结果表明，由Ptr5^+基因编码的蛋白质是核孔因子NUP85P的裂变酵母同源物。蛋白质内和外部转运在PTR5突变株中正常，这表明Ptr5p是一个专门用于运输mRNA核核能的核孔因子。此外，PTR9基因与SFILP相同，SFILP与纺锤体体（SPB）形成有关。在PTR9突变株中观察到细胞形态的异常，这表明细胞周期进展的调节与mRNA核输出机制之间可能存在某种关联。 2。与人肢体发育不良相关的遗传疾病在删除DSS1的裂变酵母同源基因（导致旋转手/分裂足部疾病的基因）时表现出异常，导致手/分裂的脚部疾病，显示了mRNA的核输出中的异常。在本文中，我们将PADLP（蛋白酶体的构成因子）确定为DSS1缺失菌株的多拷贝抑制剂。该结果表明DSS1通过蛋白酶体功能。 3。当将荧光标记为FTZ Pre-MRNA被显微注射到HeLa细胞核中时，将荧光前MRNA剪接在细胞核中，与SC35的斑点共定位，然后核转运到细胞质中。结果表明，与无固有的cDNA衍生的mRNA相比，前MRNA被更快地运输到细胞质中，并且剪接反应促进了核输出。使用RT-PCR，我们揭示了荧光mRNA并未在细胞内降解，转录抑制会抑制核出口，并且未转运的荧光mRNA在核中的新域TIDR中积聚。该实验系统在将来可能是可视化mRNA核转运的唯一系统。