分裂酵母を用いたRev蛋白及びRev蛋白結合因子の解析

使用裂殖酵母分析 Rev 蛋白和 Rev 蛋白结合因子

基本信息

批准号：
08269219
负责人：
谷時雄
金额：
$ 1.6万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08269219/
关键词：
Rev蛋白 mRNA核外輸送分裂酵母 HIV スプライシング Rev結合蛋白

项目摘要

HIVのRev蛋白は、RRE配列を持つmRNA前駆体のスプライシング反応の抑制と、イントロンを含んだままの前駆体RNAの核外への輸送を促進することが知られている。Rev蛋白は、動物細胞では核小体に局在し、HIVウイルスの生活環において重要な調節因子の役割を担っているが、mRNAの核外輸送機構の面からも極めて興味深い因子である。我々は、遺伝的操作が行いやすく、かつ高等真核生物との類似点の多い分裂酵母を用いて、Rev蛋白の機能及びRev蛋白と結合する細胞内因子の解析を試みている。まず、野生型分裂酵母内で発現させたRev蛋白の核内での分布を調べたところ、発現されたRev蛋白が酵母核の核小体側の核膜付近に多量に局在することを明らかにした。この結果は、Rev蛋白と相互作用する因子が、酵母に於いては、核小体側の核膜付近に存在している可能性を示唆する。さらに、我々が分離している7種類の分裂酵母におけるmRNA核外輸送温度感受性変異株(ptr1〜ptr7)におけるRev蛋白の局在を、許容温度下(26℃)およびmRNAの核外輸送が阻害される制限温度下(36℃)で解析したところ、変異株の一つptr7変異株内ではRev蛋白の核膜付近への局在が消失していることが明らかになった。このことは、Rev蛋白の核内局在がmRNA核外輸送機構と何らかの密接な関連性を持つことを示している。また、酵母Two hybrid systemを用いたRev蛋白結合因子の探索を続行中である。

已知HIV的REV蛋白可以通过RRE序列抑制mRNA前体的旋转反应，并用内含子促进向前体RNA的外部运输。 Rev蛋白是位于核中的动物细胞中的一个非常有趣的因素，在HIV病毒活环中起着重要作用，但从mRNA的课外运输机制中起着重要作用。我们正在尝试分析使用部门酵母与Rev蛋白结合的Rev蛋白质和细胞内因子的功能，该酵母易于执行遗传操作，并且具有许多相似之处，具有高度优化的桉术。首先，当Rev蛋白在野生型酵母中表达的分布很明显，表达的Rev蛋白位于酵母核核侧的核膜附近。该结果表明，与Rev蛋白相互作用的因子可能存在于酵母细胞核侧的细胞核膜附近。此外，在七种类型的分离的酵母菌中，Rev蛋白在mRNA核移植温度敏感的突变体（PTR1至PTR7）中的定位抑制了mRNA核转运的内部（36°C）的内部。揭示了其中一个突变股在Rev蛋白的细胞核膜附近失去了位置。这表明Rev蛋白的核位置与mRNA核运输组织有着密切相关的。此外，使用酵母两种混合系统搜索Rev蛋白质组合因子。