GABAシナプスにおけるカルシウム結合蛋白、レセプター及びトランスポーターの解析

GABA 突触中钙结合蛋白、受体和转运蛋白的分析

基本信息

  • 批准号:
    04267219
  • 负责人:
  • 金额:
    $ 0.96万
  • 依托单位:
  • 依托单位国家:
    日本
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
  • 财政年份:
    1992
  • 资助国家:
    日本
  • 起止时间:
    1992 至 无数据
  • 项目状态:
    已结题

项目摘要

神経細胞内でのカルシウム結合蛋白parvalbuminPVの局在を明らかにするため小脳のPurkinje細胞をモデルとして選び、コロイド金(直径15nm)標識二次抗体を用いた、いわゆるコロイド金免疫電顕を行なった。直接倍率1万倍で撮影し、写真上でPurkinje細胞及び他の細胞の各部位を同定し、単位面積(1mm^2)当たりのコロイド金粒子数を測定した。コロイド金免疫電顕におけるコロイド金密度と抗原密度との相関について調べる目的で、既知量のPVを含有している標準試料を作製した。ラットの筋肉からHPLCを用いてPVを精製し、牛血清アルブミンに一定量の精製PVを溶解し、固定液(グルタールアルデヒド)を混合して固定した。固定した標準試料は脳組識と全く同様の方法でLowicry1樹脂包理し、電顕レベルでの包理後免疫細胞化学を行なった。コロイド金密度(粒子数/μm^2)は細胞体及び樹状突起で15-20、軸索及び軸索終末50-60であり、明らかに細胞内におけるPVの濃度差があった。速筋であるm.gastronemiusでは生化学的解析により細胞内のPV濃度が300-550μMと推定されるがコロイド金免疫電顕でのコロイド金密度をPV標準試料のCalibration curveで検討したところ筋内PV濃度は400μMであると推定された。このことからPV標準試料のCalibration curveが一般の生物試料に適用できることが明らかになった。これに基づいてPV濃度を細胞体樹状突起では50-100μM、軸索及び終末部では1-2mMであろうと推定した。PVは小脳Purkinje細胞内分布での解析から、ニューロンの出力部である軸索及び軸索終末により高濃度存在していることが示唆された。このことはPVの発現が発生的にはニューロンの成熟と平行して増加してくることも含めて、その機能を考える上で重要な意味を有していると思われる。
为了阐明神经元中钙结合蛋白白细胞的定位,我们选择了小脑Purkinje细胞作为模型,我们使用胶体金(直径15 nm)标签的二级抗体进行了所谓的胶体金免疫电子显微镜。在照片上鉴定出浦肯野细胞和其他细胞的部位,并测量每单位面积(1 mm^2)的胶体金颗粒的数量。为了研究胶体金密度与抗原密度之间的相关性,制备了包含已知量PV的标准样品。使用HPLC从大鼠肌肉中纯化PV,并将一定量的纯化PV溶解在牛血清白蛋白中,并通过与固定剂(戊二醛)混合固定。通过Lowicry1树脂以与脑组织完全相同的方式掺入固定标准样品,并在电子显微镜水平掺入后进行免疫细胞化学。细胞体和树突,轴突和轴突末端50-60的胶体金密度(颗粒数/μm^2)为15-20,细胞内PV的浓度明显差异。在快速两次的M.Gastronemius中,细胞内PV浓度估计为300-550μM,通过生化分析,但是当通过PV标准样品的校准曲线检查胶体金密度时,估计估计肌内PV浓度为400μm。这表明校准曲线是PV标准样品,可以应用于一般的生物样品。基于此,我们估计在体细胞树突中的PV浓度为50-100μm,轴突和末端中的PV浓度为1-2 mm。小脑Purkinje中PV细胞内分布的分析表明,轴突和轴突末端中存在高浓度,这是神经元的输出。人们认为这在考虑其功能方面具有重要意义,包括PV表达与神经元成熟并行增加。

项目成果

期刊论文数量(10)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
T.KOSAKA: "Monoclonal antibody473selectively stains a subpopulation of GABA ergic neurons containing the calcium-binding protein parvalbumin in the rat cerebral cortex." Experimental Brain Research. 89. 104-114 (1992)
T.KOSAKA:“单克隆抗体 473 选择性地对大鼠大脑皮层中含有钙结合蛋白小清蛋白的 GABA 能神经元亚群进行染色。”
  • DOI:
  • 发表时间:
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  • 影响因子:
    0
  • 作者:
  • 通讯作者:
J.Q.REN: "Quantitative analysis of neurons and glial cells in the rat somatosensory cortex,with special reference to GABA ercic neurons and parvalbumin-containig neurons." Experimental Brain Research. 92. 1-14 (1992)
J.Q.REN:“大鼠体感皮层神经元和神经胶质细胞的定量分析,特别是 GABA 神经元和含有小清蛋白的神经元。”
  • DOI:
  • 发表时间:
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
  • 通讯作者:
T.KOSAKA: "Axons and axon terminals of cerebellar Purkinje cells and basket cessl have higher levels of parvalbumin immunoreactivity than somata and dendrites:quantitative analysis by immunogbld labeling." Experimental Brain Research.
T.KOSAKA:“小脑浦肯野细胞和篮子细胞的轴突和轴突末端比体细胞和树突具有更高水平的小清蛋白免疫反应性:通过免疫球蛋白标记进行定量分析。”
  • DOI:
  • 发表时间:
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
  • 通讯作者:
K.KOSAKA: "Postnatal X-ray irradiation effects in glimerular layer of rat olfactory bulb:quantitative and immunocytichemmical and lysis." Experimental Brain Research. 90. 103-115 (1992)
K.KOSAKA:“出生后 X 射线照射对大鼠嗅球神经小球层的影响:定量、免疫细胞化学和裂解。”
  • DOI:
  • 发表时间:
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
  • 通讯作者:
T.KOSAKA: "Chemically defined subpopulations of cortical GABA ergic neurons." Neuroscience. 18. 51-59 (1992)
T.KOSAKA:“化学定义的皮质 GABA 能神经元亚群。”
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  • 发表时间:
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    0
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