Detection of ALS origin with reference to calcium-binding proteins, those generate glial inflammation

参考钙结合蛋白检测 ALS 起源，这些蛋白会产生神经胶质炎症

基本信息

批准号：
22K07517
负责人：
林信太郎
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

项目摘要

①研究計画書に基づき、カルシウム結合蛋白 (カルビンディン, CB; カルレチニン, CR; パルブアルブミン, PV)によるグリア性炎症惹起性の検証を以下の方法で行った。マウス株化ミクログリア6-3細胞 (COSMO BIO Co.LTD)を96ウェルプレートに播種した後、培養液にエンドトキシンフリーであることを確認したリコンビナント蛋白、CB、CR、PV (0, 1, 10, 100 nM)を添加しday1-3の各培養上清に含まれる17種類のケモカイン/サイトカイン（CXCL1, GM-CSF, IFNγ, IL-1β, IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-9, IL-10, IL-12p70, IL-13, IL-17A, MCP1, MIP1a, MIP1b, TNF-α）をFirePlex-96 Key Cytokines (Mouse)Immunoassay panel (Abcam, ab235656)で測定した。測定前に各dayにおいて細胞をパラフォルムアルデヒド固定しクリスタルバイオレット染色を行い、細胞の生存を確認した。この結果、測定した全項目の中で100 nM、day3のCR添加群においてMCP1の有意な増加を認めた (測定値は②に示す（pg/ml）。両側t検定；無添加群 vs. 100 nM: p=0.040, 1 nM vs. 100 nM: p=0.033, 10 nM vs. 100 nM: p=0.045)。残り16項目のケモカイン/サイトカインについて有意な変動はなかった。 CB、PV添加群では一部の検体で測定値が得られたがばらつきが大きく判定不可とした。②(無添加群)118.4±21.8,　(1nM)177.6±20.9, (10nM)190.0±25.1, (100nM)328.5±79.2

1）基于研究计划，使用以下方法验证了使用钙结合蛋白（Calvindin，CB； Calretinin，Cr； Parvalbumin，PV）诱导神经胶质炎症的。在96孔板中将小鼠小鼠小胶质细胞（Cosmo Bio Co.LTD）（Cosmo Bio Co.LTD）添加到重组蛋白，CB，CR，CR和PV（0、1、10、100 nm）和17种类型的趋化因子/细胞因子（CXCL1，GM-CSF，GM-CSF，IFNγ，Il-1），Il-1-il-1-il-il-1-il-il-1-2在第1天的每个培养物级别中，IL-6，IL-9，IL-10，IL-10，IL-12P70，IL-13，IL-17A，MCP1，MIP1A，MIP1A，MIP1B，TNF-α）均添加到第1天的每个培养物级别的超96天。用关键的细胞因子（小鼠）免疫测定面板（ABCAM，AB235656）测量。在测量之前，将细胞固定在多聚甲醛中，并每天用晶体紫染色，以确认细胞的存活。结果，在所有测量项目的100 nm和第3天的CR组中观察到MCP1的显着增加（测得的值以②（pg/ml）为单位（pg/ml）。两尾t检验；无添加剂对100 nm：p = 0.040，1 nm vs.1 nm vs. 100 nm vs. 100 nm：p = 0.033，10 nm vs.100 nm vs. 100 nm：pss ps = 0.0 nm：p = 0.05）。其余16种趋化因子/细胞因子没有显着变化。在CB和PV添加组中，获得了某些标本的测量值，但是变化很大，无法判断。 ②（无添加组）118.4±21.8，（1nm）177.6±20.9，（10nm）190.0±25.1，（100nm）328.5±79.2