中枢神経系におけるカルシウム結合蛋白の局在とその遺伝子発現:免疫細胞化学及びin situ hybridizationによる形態学的解析

中枢神经系统中钙结合蛋白及其基因表达的定位：通过免疫细胞化学和原位杂交进行形态学分析

基本信息

批准号：
01641542
负责人：
小坂俊夫
金额：
$ 1.09万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1989
资助国家：
日本
起止时间：
1989 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

本年度は、主に大脳皮質におけるカルシウム結合蛋白パ-ブアルブミン含有神経細胞について、免疫細胞化学による解析を進めた。1)単クロ-ン抗体VC1.1が、GABAニュ-ロンのサブポピュレ-ションの一つであるカルシウム結合蛋白パ-ブアルブミン含有神経細胞の一部を特異的に認識していることの証明VC1.1は、ネコの視覚野を抗原として得られた単クロ-ン抗体の一つで中枢神経系のかなり限られたニュ-ロン群の細胞膜近傍を認識することが報告されている。特に、大脳皮質では主に、いわゆるGABA性非錐体細胞の一部を認識するとされている。我々は、従来の大脳皮質GABA性の免疫細胞化学的解析により、GABAニュ-ロンを(1)カルシウム結合蛋白パ-ブアルブミンを含有したGABAニュ-ロン、(2)他の神経活性物質を含有したGABAニュ-ロン、(3)その他の三つのサブポピュレ-ションに分類した。これは、いわばGABAニュ-ロンの細胞質に含有される物質による化学的分類である。では、細胞表面を認識するVC1.1はこのような分類とはどのように関係しているのであろうか。我々がラット大脳皮質1次体性知覚野で検討したところ、VC1.1は、上記のGABAニュ-ロンのサブポピュレ-ションであるパ-ブアルブミン含有GABAニュ-ロンに特異的であることが判明した。このことはパ-ブアルブミン含有GABAニュ-ロンの一部は、細胞表面近傍に特異な微小環境を有していることを示している。2)ステレオロジ-による定量的解析プラスチック包埋した大脳皮質、海馬から連続した0.5μmの準超薄切片を作成し切片間距離として3μmを選びdisectorによるパ-ブアルブミン含有神経細胞の解析を開始した。3)ビオチン標識した合成オリゴヌクレオチドを用いてin situ hybridizationによる遺伝子発現について研究を開始した。

今年，我们主要利用免疫细胞化学分析了大脑皮层中含有钙结合蛋白小清蛋白的神经元。 1) 证明单克隆抗体 VC1.1 特异性识别含有钙结合蛋白小清蛋白的神经元的一部分，该神经元是 GABA 神经元的亚群 VC1.1 是使用猫视觉皮层作为抗原获得的单克隆抗体，并已被报道识别中枢神经系统中相当有限的一组神经元的细胞膜附近。特别是，据说在大脑皮层中，主要识别一些所谓的GABA非锥体细胞。通过对大脑皮层中GABA的常规免疫细胞化学分析，我们发现（1）GABA神经元含有钙结合蛋白小白蛋白，（2）GABA神经元含有其他神经活性物质（3）其他三个亚群。可以说，这是基于 GABA 神经元细胞质中所含物质的化学分类。那么，识别细胞表面的VC1.1与这种分类有何关系呢？当我们检查大鼠大脑皮层的初级体感皮层时，我们发现VC1.1对含有小清蛋白的GABA神经元具有特异性，这是上述GABA神经元的一个亚群。这表明一些含有小白蛋白的 GABA 神经元在细胞表面附近具有独特的微环境。 2) 使用体视学进行定量分析从塑料包埋的大脑皮层和海马中制作连续的 0.5 μm 的半超薄切片，选择切片之间的距离 3 μm，并使用解剖器开始分析含有小白蛋白的神经元。 3）我们开始使用生物素标记的合成寡核苷酸通过原位杂交研究基因表达。