遺伝情報の正確性を保つスプライシングチェックポイント機構の解析

维持遗传信息准确性的剪接检查点机制分析

基本信息

批准号：
23870010
负责人：
甲斐田大輔
金额：
$ 2.08万
依托单位：
University of Toyama
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
财政年份：
2011
资助国家：
日本
起止时间：
2011-08-24 至 2013-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-23870010/
关键词：
mRNA スプライシング転写

项目摘要

スプライシング異常と転写との関係を調べるため、細胞をスプライシング阻害剤であるスプライソスタチンAで処理した後、いくつかの遺伝子の発現レベルを解析した。この際、半減期が長く安定性の高いmRNAの変化も捕らえるために、新規に合成されたmRNAのみを抽出し、解析の対象とすることとした。この解析の結果、多くの遺伝子において、スプライシング阻害時には遺伝子の3'末端の発現量が低下することが明らかとなった。さらに、そのようなパターンを示したいくつかの遺伝子の発現レベルを定量的RT-PCR法を用いて詳細に解析したところ、1.スプライシングを阻害するスプライソスタチンAの処理条件(濃度ならびに処理時間)と、遺伝子の3'末端の発現低下を引き起こすスプライソスタチンAの処理条件は一致する、2.細胞をスプライソスタチンAで処理した後、スプライソスタチンAを培地から除くと、スプライシング活性が回復すると同時に遺伝子の3'末端の発現量も回復する、という2点のことが明らかとなった。以上の結果は、スプライシング異常が遺伝子の3'末端の発現低下を引き起こしていると解釈出来る。現在までに多くの研究者によって、転写がスプライシングをはじめとした転写後修飾の効率に影響を与えることが示されてきたが、この結果は、転写後修飾が転写に影響を与える、いわゆるフィードバック機構もしくはチェックポイント機構の存在を強く示唆するものである。

为了研究剪接异常与转录之间的关系，我们分析了用剪接抑制剂 spliceostatin A 处理细胞后几个基因的表达水平。此时，为了捕获具有长半衰期和高稳定性的mRNA的变化，我们决定仅提取新合成的mRNA并将其用于分析。该分析的结果表明，当剪接受到抑制时，许多基因的3'末端的表达水平降低。此外，我们使用定量RT-PCR详细分析了几个表现出这种模式的基因的表达水平，发现：1.剪接抑制素A的处理条件（浓度和处理时间）导致剪接的表达下降；基因的 3' 末端。 spliceostatin A的处理条件匹配。 2.用spliceostatin A处理细胞后从培养基中除去spliceostatin A，剪接活性恢复，同时基因3'端的表达水平也增加。有两件事变得清晰：恢复。上述结果可以解释为剪接异常导致基因3'端表达减少。迄今为止，许多研究人员已经证明转录会影响剪接等转录后修饰的效率，或者强烈表明检查点机制的存在。