遺伝情報の正確性を保つスプライシングチェックポイント機構の解析

维持遗传信息准确性的剪接检查点机制分析

基本信息

批准号：
23870010
负责人：
甲斐田大輔
金额：
$ 2.08万
依托单位：
University of Toyama
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
财政年份：
2011
资助国家：
日本
起止时间：
2011-08-24 至 2013-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-23870010/
关键词：
mRNA スプライシング転写

项目摘要

スプライシング異常と転写との関係を調べるため、細胞をスプライシング阻害剤であるスプライソスタチンAで処理した後、いくつかの遺伝子の発現レベルを解析した。この際、半減期が長く安定性の高いmRNAの変化も捕らえるために、新規に合成されたmRNAのみを抽出し、解析の対象とすることとした。この解析の結果、多くの遺伝子において、スプライシング阻害時には遺伝子の3'末端の発現量が低下することが明らかとなった。さらに、そのようなパターンを示したいくつかの遺伝子の発現レベルを定量的RT-PCR法を用いて詳細に解析したところ、1.スプライシングを阻害するスプライソスタチンAの処理条件(濃度ならびに処理時間)と、遺伝子の3'末端の発現低下を引き起こすスプライソスタチンAの処理条件は一致する、2.細胞をスプライソスタチンAで処理した後、スプライソスタチンAを培地から除くと、スプライシング活性が回復すると同時に遺伝子の3'末端の発現量も回復する、という2点のことが明らかとなった。以上の結果は、スプライシング異常が遺伝子の3'末端の発現低下を引き起こしていると解釈出来る。現在までに多くの研究者によって、転写がスプライシングをはじめとした転写後修飾の効率に影響を与えることが示されてきたが、この結果は、転写後修飾が転写に影響を与える、いわゆるフィードバック機構もしくはチェックポイント機構の存在を強く示唆するものである。

为了研究剪接异常和转录之间的关系，用剪接抑制剂剪接素A处理细胞，并分析了几种基因的表达水平。在这种情况下，为了捕获长期寿命和高度稳定的mRNA的变化，仅提取了新合成的mRNA并用作分析主题。该分析表明，在许多基因中，抑制剪接时，基因3'末端的表达水平会降低。 Furthermore, when the expression levels of several genes that exhibited such a pattern were analyzed in detail using quantitative RT-PCR methods, it was revealed that 1. The treatment conditions for spliceostatin A, which inhibits splice, and the treatment conditions for spliceostatin A, which inhibits splice, are consistent with the treatment conditions for spliceostatin A, which causes a decrease in expression at the 3' end of the gene, and 2. If the用剪接蛋白A处理细胞，然后从培养基中去除剪接素A，将剪接活性恢复，并在基因3'末端恢复表达水平。以上结果可以解释是由于剪接异常导致基因3'末端表达降低的结果。迄今为止，许多研究人员表明，转录会影响转录后修饰的效率，包括剪接，但这种结果强烈表明存在所谓的反馈或检查点机制，其中转录后修改会影响转录。