mRNA遺伝情報の正確性に関する化学生物学的研究

mRNA遗传信息准确性的化学生物学研究

基本信息

批准号：
18780091
负责人：
甲斐田大輔
金额：
$ 2.24万
依托单位：
The Institute of Physical and Chemical Research
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-18780091/
关键词：
スプライシング mRNA 低分子化合物

项目摘要

前年度において同定したFR901464の細胞内標的であるSF3b複合体とFR901464との結合様式を詳細に検討した。なお,以後の実験ではFR901464のメチルアセタール体であり、化学的により安定な化合物スプライソスタチンAを用いた。まず、スプライソスタチンAとSF3b複合体の結合が、共有結合と非共有結合のいずれであるかを確かめたところ、この結合は非共有結合であることがわかった。次に、SF3b複合体は7つのタンパク質からなっていることが知られているが、スプライソスタチンAはどのタンパク質と直接結合しているかを検討したところ、断定はできないものの、構成タンパク質のSAP155,もしくはSAP130のいずれかに結合していることが示唆されるデータを得た。次にスプライソスタチンA処理によって蓄積した未成熟mRNAが核外に輸送されるのかどうかを確かめるために、FISH法を用いpoly(A)-RNAの局在を観察したところ、その大部分が核内に蓄積しスプライシング因子であるSC35と共局在を示した。しかし、核内と細胞質のmRNAを分画しRT-PCR法を用いて実験を行ったところ、未成熟mRNAの一部は核外に局在していることがわかり、その一部の細胞質に輸送された未成熟mRNAが翻訳され異常なタンパク質が生成されていることが示唆された。しかし、何種類かの遺伝子においてスプライソスタチンA処理による未成熟mRNAの蓄積と、異常タンパク質の生成に関して実験を行ったところ、調べた限り全ての遺伝子で未成熟mRNAの蓄積が観察されたものの、異常なタンパク質の生成はいくつかの遺伝子に限られていた。以上のことから、スプライソスタチンAは未成熟mRNAの核外輸送にも関わっていることが示唆された。

详细检查了FR901464的结合模式，即FR901464的细胞内靶标。在以下实验中，使用了FR901464和化学上更稳定的化合物脊丁素A的甲基乙酰属形式。首先，我们证实了脊柱蛋白A和SF3B复合物是共价还是非共价，发现该键是非共价的。接下来，尽管众所周知，SF3B复合物是由七个蛋白质组成的，但是当我们研究了哪种蛋白质上的脊柱蛋白A直接与与组成蛋白SAP155或SAP130结合的数据直接结合，尽管无法确定它与组成蛋白SAP155或SAP130结合。接下来，为了检查是否通过斑点毒素A累积的未成熟mRNA在细胞核外运输，我们使用FISH方法观察到poly（a）-RNA的定位，并且大多数它在核中积累，并与剪接因子SC35显示了共定位。但是，当我们分级细胞核和细胞质mRNA并使用RT-PCR进行了实验时，我们发现某些未成熟的mRNA位于核外部，这表明已转运至细胞质的未成熟mRNA已被翻译成产生异常蛋白质。然而，通过在几种基因和异常蛋白质产生中的脊柱蛋白A处理中进行了有关未成熟mRNA的积累的实验。就我们研究而言，在所有基因中都观察到了未成熟mRNA的积累，但是异常蛋白质的产生仅限于几种基因。以上表明脊柱抑制素A也参与了未成熟mRNA的核转运。