巨大ゲノムDNA導入による発生異常突然変異遺伝子の探索・単離

通过引入大基因组DNA寻找和分离发育异常突变基因

• 批准号: 07672449
• 负责人: 阿部 訓也
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Kumamoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07672449/
• 关键词: YAC; 発生; 突然変異; tコンプレックス; ゲノム解析; YAC; 発生; 突然変異; tコンプレックス; ゲノム解析

今年度は、従来のトランスジェニックマウス作製技術に関する諸問題の克服と新しい利用法を目指して、酵母人工染色体(YAC)にクローニングされた哺乳類ゲノムDNAを導入したマウス個体作製技術の開発とその応用に関する研究を行った。特に、ポジショナルクローニング法における突然変異責任遺伝子の同定、単離に関する応用として、これまで解析を進めてきたマウス17番染色体のt-コンプレックスに位置する発生異常突然変異の機能的レスキューの実験を進めている。現在まで、初期発生に関与するt^<w5>変異、神経系細胞の分化、機能に関するqk(quaking)変異に関し、数百kbの範囲にまで原因遺伝子に迫っている。これらはいずれも劣性突然変異であり、変異原因遺伝子を含むと予想されるYACDNA導入により突然変異がレスキューされるか否かを指標として導入ゲノム中の原因遺伝子の探索を行うことを試みている。これまでにt^<w5>領域から650kbのYACクローンを得、マウス受精卵に導入し、3系統のYAC導入トランスジェニックマウス、Y11,Y31,Y35を樹立した。Y11系統では〜420kb、Y31系統では〜270kb,Y35系統では〜380kbの長さのYACDNAが導入されていること、さらにトランスジーンのゲノムへの組込み部位は全ての系統で一カ所であり、かつ17番染色体以外であることをFISHによって確認した。これからは、それらのマウスを交配し実際にt^<w5>変異がレスキューされるかを検討していく。またqk変異に関しても同様な実験、およびすでに見つかった候補遺伝子のノックアウトマウス作製を進めている。

今年，我们对小鼠个体生产技术的开发和应用进行了研究，该技术引入了克隆的哺乳动物基因组DNA（YACS），目的是克服与常规转基因小鼠生产技术和新用途相关的各种问题。特别是，我们目前正在进行功能救援实验，以开发位于小鼠染色体17的T复合物的异常突变，以应用于位置克隆方法中突变负责基因的鉴定和隔离。迄今为止，我们已经能够进入有关早期发育，神经系统细胞的分化以及与功能相关的质量突变涉及的T^<w5>突变范围内的因果基因。所有这些都是隐性突变，我们正在尝试使用索引在引入基因组中的因果基因搜索是否通过Yacdna引入拯救突变，该突变被预期包含引起突变的基因。到目前为止，已经从T^<w5>区域获得了650 KB YAC克隆，并引入了受精的小鼠卵，并建立了三只YAC诱导的转基因小鼠，Y11，Y31和Y35。 Fish证实，Yacdna被引入Y11线，至420 KB，在Y31线中至270 kb，在Y35线中介绍了380 kb，并且在Y35线中，整合到跨基因的基因组的地点是所有线路上的一个位置，并且不是现在的镀铬，我们将继续跨越这些小鼠，实际上将继续考虑t^5 <w5 <w5。此外，关于QK突变的类似实验，以及已经发现的候选基因的基因敲除小鼠的产生。