マウス始原生殖細胞における遺伝子発現の解析
小鼠原始生殖细胞基因表达分析
基本信息
- 批准号:10160215
- 负责人:
- 金额:$ 1.34万
- 依托单位:
- 依托单位国家:日本
- 项目类别:Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
- 财政年份:1998
- 资助国家:日本
- 起止时间:1998 至 无数据
- 项目状态:已结题
- 来源:
- 关键词:
项目摘要
我々は生殖系列分岐の鍵となる始原生殖細胞(PGC)に着目し,この細胞に発現する遺伝子の体系だった解析を行うことを目的とし研究を開始した.PGCは初期胚にごく少数、それも体細胞にかこまれたかたちで存在するため、研究材科として直接取り扱うことが困難であった.そこで、PGCのマーカーであるアルカリフォスファターゼ遺伝子をlacZ遺伝子で置換したTNAP(組織非特異型アルカリフォスファターゼ)ノックアウトマウスを用い、lacZレポーター発現を指標としてPGCを分離、純化するFACS-gal法を確立した.10.5日-14.5日胚がらPGCを実際にソーティングし、各種マーカーを用いた検索によりほぼ100%に近い純度のPGCが得られたことを確かめた.さらに,より初期のPGC単離のために,Oct3/4プロモーターにGFPをつないだコンストラクトを用いて,トランスジェニックマウスを作製し,これらのトランスジェニック系統の胚体から,より効率良くPGCを単離してくることが可能になった.この純化PGCを用い、テロメレース活性測定やゲノムDNAメチル化様式などの解析が可能になった.また,これを材料に、ローンリンカー法(Mamma1ian Genome2;252-259、1992)によりcDNAライブラリー作製を行った.この純化PGCからのcDNAは既知遺伝子のPGCでの発現解析のみならず、PGCにおける遺伝子発現プロファイルを解析、記述するために有用である.その解析の一端としてこれまで13.5日胚の雌難のPGCそれぞれのライブラリーから4000クローンをピックアップし、2800クローンの配列決定を行なった.このうち有効な配列情報の得られた1555クローンに関してホモロジー検索を行った.その多くはESTクローンを含め既知の遺伝子と相同性を示した.また雌雄で出現頻度に差異のあるクローンも複数認められた.将来的には,PGC各発生段階からライブラリーを作製,解析することにより興味深い配列モチーフを持つクローンやステージ特異的発現を示すクローンを単離し,機能解析につなげていきたいと考えている.また,始原生殖細胞の属性を遺伝子発現レベルで理解していくために,cDNA microarrayを用いた網羅的発現解析を計画している.
我们专注于原始生殖细胞(PGC),这是生殖系分支的关键,并开始研究,目的是对这些细胞中表达的基因进行分析。由于PGC在早期胚胎中的数量很少,因此在体细胞中也发现了它们,因此很难直接将其作为研究材料部门。因此,我们建立了使用TNAP(非组织特异性碱性磷酸酶)基因敲除小鼠的FACS-GAL方法,其中碱性磷酸酶基因(PGCS的标志物)被LACZ基因取代,并确定了FACS-GAL方法,该方法以LACZ RECZERTER表达的表达为指标。 10.5天-PGC实际上在14.5天进行了分类,使用各种标记的搜索证实,纯度纯度的PGC获得了近100%。此外,对于早期的PGC隔离,使用将GFP连接到OCT3/4启动子的构建体制备了转基因小鼠,并从这些转基因菌株的胚胎中更有效地分离了PGC。使用这种纯化的PGC,可以进行端粒酶活性测量和基因组DNA甲基化模式。此外,使用此材料,我们使用了孤立的接头法(Mamma1ian)。使用Genome2; 252-259,1992)制备cDNA文库。来自该纯化的PGC的cDNA可用于分析和描述PGC中的基因表达谱以及分析和描述PGC中的基因表达谱。作为该分析的一部分,已经从13.5天的胚胎的女性PGC库中挑选了4,000个克隆,并对其进行了2,800个克隆的序列。其中,通过有效的序列信息获得了1555。同源性搜索是在克隆上进行的。其中许多显示与已知基因(包括EST克隆)的同源性。此外,还观察到了男性和女性发生频率不同的几个克隆。将来,我们希望通过创建和分析PGC的每个发育阶段的库来隔离具有有趣的序列基序和克隆的克隆,并将其与功能分析联系起来。为了了解基因表达水平的原始生殖细胞的属性,cDNA我们正在计划使用微阵列进行详尽的表达分析。
项目成果
期刊论文数量(7)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
Kondo,T. et al.: "Genomic organization and expression analysis of the mouse qkl locus." Mammalian Genome. (印刷中). (1999)
Kondo, T. 等人:“小鼠 qkl 基因座的基因组组织和表达分析”(正在出版)。
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- 通讯作者:
A,Kikuti.et al.: "cDNA Cloning,Northern hybridization and mapping Shigenari,A.,Kawata,H.,Ikemura,T.analysis of a putative GDS(guanine nucleotide dissociation,Kimura M.,and Inoko,H.stimulator of G proteins)-related protein gene at the centromeric ends of t
A,Kikuti. 等人:“cDNA 克隆、Northern 杂交和作图 Shigenari,A.、Kawata,H.、Ikemura,T. 假定 GDS 的分析(鸟嘌呤核苷酸解离、Kimura M. 和 Inoko,H.stimulator)
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- 发表时间:
- 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:
- 通讯作者:
S,Kawakami. et al.: "Tctex-3,related to Drosophila Polycombike,isspecifically expressed in male germ cells and mapped to t-complex of mouse." Mammalian Genome. 9. 874-880 (1998)
S,川上。
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- 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:
- 通讯作者:
Ksnsme,T. et al.: "Testis b-1,4-galactosyltransferase gene maps to mouse chromosome 5." Genomics. 53. 117-118 (1998)
Ksnsme,T.
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- 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:
- 通讯作者:
Kimura,S.et al.: " Muscle type promoter and its first intronabnormalities in dystrophin in dystrophin gene in patients with Duchenne muscular dystrophy." J.Child.Neurol.13. 290-292 (1998)
Kimura,S.et al.:“杜氏肌营养不良症患者的肌营养不良蛋白基因中的肌肉类型启动子及其第一个内含子异常。”
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- 发表时间:
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