純化PGCライブラリーを用いた生殖系列遺伝子発現の研究

使用纯化的 PGC 文库研究种系基因表达

基本信息

批准号：
11149220
负责人：
阿部訓也
金额：
$ 1.6万
依托单位：
Kumamoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11149220/
关键词：
生殖系列幹細胞 cDNA解析トランスジェニックマウス遺伝子発現

项目摘要

生物を構成する細胞の中で生殖細胞は唯一、次世代に受け継がれると言う意味で不死であり、また全能性を有するという点で、非可逆的な分化を行う体細胞とは大きく異なり、生物種の存続、進化を考える上で非常に重要な細胞である.しかし、その分子的実体の殆どが不明である.これは、生殖系列の各ステージでどのような遺伝子が発現するかという基本的知見の欠如に起因するところ大である.そこで、本研究では、始原生殖細胞(Primordial Germ Cell;PGC)を純化単離し、そこに発現する遺伝子を網羅し、他の細胞と比較することによって生殖系列発生過程に発現し、利用される遺伝情報を明らかにし、始原生殖細胞の成立、維持、その属性を規定するための遺伝子的基礎を追究していくことを目的とする.今年度はOct-GFPトランスジェニックマウスの胎生11.5日,12.5日,13.5日の雌雄胚それぞれからPGCを単離し,ライブラリーを作製し,各ライブラリーから1万クローン,計6万クローンをピックアップしタイタープレート中に凍結保存した.これらのクローンを用いて、高密度にコロニーを整列させたmacroarray blotを作製した.また、TNAPマウス由来の胎生13.5日雌雄PGC cDNAクローンの配列決定を行った.この配列情報を用いて詳細なcDNA解析を行った.(nr)データベースに対するblastn(核酸配列レベルの検索)検索の結果、既知909,既知遺伝子に相同性のあるもの261,相同性のないもの356,計1526,これを自己相同性検索にかけると,それぞれ286,247,343,計876となり,redundantなもののほとんどが既知のものに集中していることがわかる.既知配列を除いた未知の549配列を用いてblastx(アミノ酸配列レベルの検索)で検索したところ,185は既知のものと(他生物種の遺伝子を含む)相同性が認められた.blastxでも未知のもののうち202クローンをESTデータベースに対して検索を行ったところ、164は様々なライブラリー由来のESTに対して相同性が認められた.その結果、全く新規な配列は38となった.

生殖细胞是唯一组成生物的细胞，并且是唯一不朽的细胞，因为它们是下一代遗传的，并且与反对派倒置的坚固细胞截然不同，并且非常不同。这是一个非常重要的细胞，在物种的生存和进化中，大多数分子物质是未知的。在这项研究中，缺乏知识，是通过净化PRIM和生殖细胞（PGC）产生的，涵盖了出现的基因，并且与其他细胞相比。附属过程，追求原始生殖细胞的形成，维持原始生殖细胞，并追求遗传基础，以规定属性。从每个库中捡起10,000个克隆和60,000个克隆，并在更紧密的板上进行冻结进行了。，总共1526。当涉及自我障碍搜索时，可以发现它是286,247,343，总计876，可以看出，大多数冗余都集中在已知的项目上。，发现185个已知（包括其他活物种的基因）。。