組み換えアストロサイト移入によるSCID-hu-MSの脱髄機構の解明

通过重组星形胶质细胞移植阐明 SCID-hu-MS 脱髓鞘机制

• 批准号: 06670653
• 负责人: 佐古田 三郎
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06670653/
• 关键词: サイトカイン; 脱髄; アストロサイト; IL-2; interferon-γ; 免疫不全マウス

severe combined immunodeficiency(SCID)miceは成熟したTおよびB細胞がなく中枢神経系でのサイトカインネットワークを研究するためには良いシステムである.私どもはサイトカインのみで中枢神経系の脱髄が生じうるという仮説のもとに本研究を行った.SCIDマウスよりアストロサイトを分離しそれにIL-1β,IL-6,TNF-α,IL-2のcDNAを導入しneomysin抵抗性の株を選択した.それぞれのサイトカインの発現はRT/PCRにて確認し,蛋白レベルの発現はELIZAと感受性細胞のバイオアッセ-を行った.それらの細胞を単独および種々の組み合わせでSCIDマウスの脳内に移入し,2週間後にマウスを屠殺し神経病理学的に検討した.その他ヒトIL-2とマウスinterferon-γ(INF-γ)のリコンビナントを脳内に注射し,同様の実験を行った.コントロールにはそれぞれのリコンビナントを加熱により不活化したものを用いた.単独で上記アストロサイトのトランスフェクタントを移入した場合,IL-2のトランスフェクタントでのみ壊死と脱髄が高頻度に観察された.これら病変は細胞移入部からかなり離れた白質にもみられた.その他のサイトカイントランスフェクタント単独および組み合わせでは刺入部の変化以外は病変を認めなかった.IL-2のリコンビナントをSCIDマウスの白質に注射した場合もIL-2トランスフェクタントの場合と同様の結果を得た.INF-γのリコンビナントの場合は白質に限局したvacuolation(脱髄)が高頻度に観察された.IL-2やINF-γはSCIDマウスのNK細胞を活性化する.活性化されたNK細胞は再びINF-γを放出しグリア細胞からTNF-αやinducible NO synthase(iNOS)を誘導しオリゴデンドロサイトに障害を与えると考えられる.

严重的联合免疫缺陷（SCID）小鼠是研究中枢神经系统中的细胞因子网络的好系统，而无需成熟的T和B细胞。我们对单独的细胞因子可能导致中枢神经系统脱髓鞘的假设进行了这项研究。我们从SCID小鼠中分离出星形胶质细胞，并引入了IL-1β，IL-6，TNF-α和IL-2的cDNA，然后是Neomysin Control。选择抗活性菌株。每种细胞因子的表达通过RT/PCR证实，蛋白质水平表达通过Eliza和敏感细胞的生物测定进行。将这些细胞单独转移到SCID小鼠的大脑中，并在各种组合中转移到小鼠中，两周后才处以神经病理学。将人IL-2和小鼠干扰素-γ（INF-γ）的其他重组分入大脑中，并进行了类似的实验。通过加热每种重组来进行对照进行对照。当单独转移星形胶质细胞转染剂时，仅在IL-2转染剂中经常观察到坏死和脱髓鞘。这些病变在白质中也显着远离细胞转移部位。单独并组合其他细胞因子转染剂，除了注射部位的变化外，没有发现病变。当将IL-2重组注射到SCID小鼠的白质中与IL-2小鼠的白质时，获得了相同的结果。在INF-γ重组的情况下，在白质中经常观察到液泡（脱髓鞘）。 IL-2和INF-γ激活SCID小鼠的NK细胞。活化的NK细胞再次释放INF-γ，并从神经胶质细胞中诱导TNF-α。人们认为它不会诱导合酶（iNOS）并损害少突胶质细胞。

项目成果

Shimizu Y.et al.: "Isolation of a cDNA clone encoding a novel membrane protein expressed in lymphocytes." FEBS Letters. 355. 30-34 (1994)

Shimizu Y.等人：“分离编码淋巴细胞中表达的新型膜蛋白的 cDNA 克隆。”

Mitsui T.et al.: "Hereditary parkinsonism with multiple system degeneration: beneficial effect of anticholinergics.but not of levodopa." Jounal of Neurological Science. 125. 153-157 (1994)

Mitsui T.et al.：“遗传性帕金森病伴多系统退化：抗胆碱能药物有益，但左旋多巴无效。”

Yoshikawa H.et al.: "An elevated expression of mRNA for peripheral myelin protein-22 in biopsied nerves of patients with Charcot-Marie-Tooth disease type 1A." Annals of Neurology. 35. 445-450 (1994)

Yoshikawa H.等人：“1A 型腓骨肌萎缩症患者的神经活检中外周髓磷脂蛋白 22 的 mRNA 表达升高。”

Yamamoto Y.et al.: "Cloning and expression of myelin-associated oligodendrocytic basic protein(MOBP): A novel basic protein constituting the CNS myelin." Jounal of Biological Chemistry. 269. 31725-31730 (1994)

Yamamoto Y.等人：“髓磷脂相关少突胶质细胞碱性蛋白（MOBP）的克隆和表达：一种构成中枢神经系统髓磷脂的新型碱性蛋白。”