子宮内発育不全発症機序に関する分子生物学的研究-妖精症をモデルとして

宫内生长受限发病机制的分子生物学研究——以仙女病为模型

基本信息

  • 批准号:
    07670830
  • 负责人:
  • 金额:
    $ 1.22万
  • 依托单位:
  • 依托单位国家:
    日本
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
  • 财政年份:
    1995
  • 资助国家:
    日本
  • 起止时间:
    1995 至 无数据
  • 项目状态:
    已结题

项目摘要

I)同定されたインスリン受容体コドン87のLeucineからProlineへの変異がインスリンの生物学的作用に影響を及ぼすかどうか検討するため我々は異常インスリン受容体(Pro87IR)cDNA発現ベクターを構築し、NIH3T3細胞へ遺伝子導入し、stable cloneを得、正常型インスリン受容体(Leu87IR)と比較した。(1)[_<35>S]methionineによるmetabolic labelingによりPro87IRは、proreceptorのdimer化に遅れを認めるが、cell surface biotinylationでは細胞表面にα,β-subunitとして認められるため、細胞内輸送には大きな影響を及ぼさないことが示された。(2)Scatchard plot解析によりPro87IRのインスリン結合親和性はLeu87IRの約15%に低下し、dissociation kineticsにおいてもインスリンのPro87IRからの解離は亢進し、Pro87IRにおけるインスリン結合親和性の低下が確認された。(3)Pro87IRβ-subunitのインスリン刺激による自己リン酸化は、Leu87IRに比べ低下しており、インスリンの生物学的作用の減弱を来していると考えられた。II)受容体におけるコドン87の機能を解析するために同部位のsite-directed mutagenesisを施行した。(1)変異型インスリン受容体(Ile87,Val87,Ala87IR)cDNA発現ベクターを構築し、NIH3T3細胞に遺伝子導入し、stable cloneを得た。(2)cell surface biotinylationにより各変異型受容体が細胞膜表面に到達することを確認した。(3)Scatchard plot解析により、Ile87,Val87IRでは結合親和性がLeu87IRの約4倍に、Ala87IRでは約15%に低下しており、dissociation kineticsにおいても、Ile87,Val87IRではインスリンの解離の遅延が、Ala87IRでは解離の亢進が認められた。(4)各変異受容体の自己リン酸化は結合親和性に比例し、Ile87,Val87IRでは濃度依存性に増加し、Ala87IRでは低下していた。以上から、コドン87はインスリン結合に直接結合しており、さらに同部位にはLeuのγ-branched side chainよりもIle,Valのβ-branched side chainの方が適していることが示された。
i)调查从亮氨酸到脯氨酸的鉴定的胰岛素受体密码子87是否影响胰岛素的生物学作用,我们构建了转染到NIH3T3细胞中的异常胰岛素受体(Pro87IR)cDNA表达载体,并获得了稳定的克隆,并将其与正常的胰岛素受体(Leu877IR)进行了比较。 (1)通过[_ <35> s]蛋氨酸的代谢标记表明,pro87IR延迟的二聚体延迟,但发现细胞表面生物素化为细胞表面上的α,β-亚基,因此对细胞内转运没有重大影响。 (2)SCATCHARD图分析降低了Pro87IR对LEU87IR约15%的胰岛素结合亲和力,并且在胰岛素与Pro87IR的解离时,胰岛素与Pro87IR的解离也增加了,表明Pro87IR中胰​​岛素结合亲和力的下降。 (3)与LEU87IR相比,胰岛素刺激的Pro87IRβ-亚基的自磷酸化减少了,被认为减弱了胰岛素的生物学作用。 ii)进行了同一位点的位置定向诱变,以分析受体在受体87的功能。 (1)构建突变体胰岛素受体(Ile87,Val87,Ala87IR)表达载体,并将基因转移到NIH3T3细胞中以获得稳定的克隆。 (2)细胞表面生物素化证实,每个突变受体都到达细胞膜表面。 (3)SCATCHARD图分析表明,ILE87和Val87IR的结合亲和力降低至Leu87ir和Ala87ir的4倍,约为15%。在解离动力学中,ILE87和Val87IR在解离时延迟,ALA87IR的解离增加。 (4)每个突变受体的自磷酸化与结合亲和力成正比,在ILE87和Val87IR中依赖浓度升高,并且在ALA87IR中降低。从上面,密码子87直接与胰岛素结合结合,并且表明ILE和Val的β支线的侧链比LEU的γ支架侧链更适合同一部位。

项目成果

期刊论文数量(4)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
中江 淳: "インスリン受容体コドン87番目のインスリン結合における機能解析" 分子糖尿病学. (in press).
Jun Nakae:“胰岛素受体密码子 87 处胰岛素结合的功能分析”《分子糖尿病学》(出版中)。
  • DOI:
  • 发表时间:
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
  • 通讯作者:
Nakae.J: "Replacement of leucine 87 in human insulin recejtor clter affinity for insulin" J.Biol Chem. 270. 22017-22022 (1995)
Nakae.J:“在人胰岛素受体细胞对胰岛素的亲和力中替换亮氨酸 87”J.Biol Chem。
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  • 通讯作者:
    坂田 栄男

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