共焦点レーザー顕微鏡とビデオ強化装置を用いた蝸牛の細胞分子生理学的研究

使用共焦激光显微镜和视频增强设备对耳蜗进行细胞和分子生理学研究

• 批准号: 07457394
• 负责人: 池田 勝久
• 金额: $ 3.9万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (B)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07457394/
• 关键词: 血管条; 有毛細胞; 細胞内Ca^<2+>; 共焦点レーザー顕微鏡; RT-PCR法; チャネル; 担体輸送

1)チャネル蛋白によるイオン輸送摘出した外有毛細胞と血管条に細胞内Ca^<2+>色素を負荷し、脱分極刺激による電位変化または細胞内Ca^<2+>濃度変化を共焦点レーザーや蛍光顕微鏡を用いた顕微画像解析装置により測定し、Caチャネルやアゴニストの受容体の細胞レベルでの局在を解明した。2)担体蛋白によるイオン輸送摘出した外有毛細胞、血管条、前庭器の細胞に細胞内Ca^<2+>、Na^+、pH色素を負荷し細胞外のイオン組成を変えることによって種々の担体蛋白系(Naポンプ、Na-Ca交換輸送、Na-H交換輸送、C1-HCO_3交換輸送Na-K-C1共輸送)を活性化して、共焦点レーザーや蛍光顕微鏡を用いた顕微画像解析装置により測定した担体蛋白の局在とその生物学的な機能解析を行った。3)イオン輸送の局在とmRNAの発現イオン輸送をコードするcDNAをプローブとしてコルチ器と外側壁それぞれより採集したmRNAよりRT-PCR法法でイオン輸送蛋(Na-K-C1共輸送体)のmRNAを同定した。

1) 通道蛋白的离子传输将细胞内Ca^<2+>染料加载到分离的外毛细胞和血管纹中，共聚焦测量电位变化或由于去极化刺激引起的细胞内Ca^<2+>浓度变化我们阐明了Ca的定位通过使用激光和荧光显微镜的显微图像分析装置进行测量，在细胞水平上检测通道和激动剂受体。 2)载体蛋白的离子转运通过将细胞内Ca^2+、Na^+和pH染料负载到分离的外毛细胞、血管纹和前庭器官细胞上并改变细胞外离子组成，形成各种载体蛋白系统（Na泵、Na-Ca交换使用共焦激光和荧光显微镜的显微图像分析装置测量载体蛋白的定位及其位置。 3)离子转运的定位和mRNA的表达使用编码离子转运的cDNA作为探针，通过RT-PCR从从Corti器官和侧壁收集的mRNA确定离子转运蛋白(Na-K-C1协同转运蛋白)。的 mRNA

项目成果

Ikeda K et al: "Calcium mobilization and entry" Cell Calcium. 18. 89-99 (1995)

Ikeda K 等人：“钙动员和进入”细胞钙。

Ikeda et al: "Effects of protein kiease C in the" Acta Otolaryrgol. (印刷中).

Ikeda 等人：“蛋白激酶 C 对 Acta Otolayrgol 的影响”（正在出版）。

Ueda et al: "Sobcellulan distribution of protein Kirass C" Hear Res. (印刷中).

Ueda 等人：“Kirass C 蛋白的 Sobcellulan 分布” Hear Res（正在出版）。

Hida Ka H et al: "The Na-K-Cl cotanporters in the rst coclloa" Biochem Biophys Res Commu. (印刷中).

Hida Ka H 等人：“第一个 coclloa 中的 Na-K-Cl 共转运蛋白”Biochem Biophys Res Commu（正在出版）。

Suzuki M et al: "ATP-induced increase in intracellular Ca^<2+> ccncentration" Hear Res. 86. 68-76 (1995)

Suzuki M 等人：“ATP 诱导的细胞内 Ca^2 浓度增加” Hear Res。