造血幹細胞ニッチとしてのヒト胎盤の役割

人胎盘作为造血干细胞生态位的作用

基本信息

批准号：
20659154
负责人：
杉山大介
金额：
$ 2.05万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2008
资助国家：
日本
起止时间：
2008 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20659154/
关键词：
発生・分化血液胎盤幹細胞

项目摘要

本研究の目的は、マウス・ヒト胎盤造血幹細胞の性質と、それを取り囲むニッチによる造血幹細胞制御機構を解明する事である。1)マウス胎盤に存在する造血幹細胞の特徴各発生段階における胎盤造血幹細胞の分布を検討するため、抗c-Kit抗体及び抗CD34抗体を用いて免疫染色を行った。またフローサイトメトリーを用いて造血幹細胞集団であるCD31,CD34,c-kit陽性細胞群を純化し、Ki-67抗体で染色することにより細胞周期が動いているか検討した。更にこれら細胞を採取し、コロニーアッセイ法を用いて造血前駆細胞活性を評価した。造血幹細胞のクラスター数はE11.5に多く、その絶対数はE12.5に多いことがわかった。またE11.5に比べてE12.5の方が細胞周期に突入している細胞が少ないことがわかり、細胞の形態に関しては、E11.5の方がいびつな形態をとるなど明らかな違いがあることが判明した。またコロニーアッセイ法によりE12.5の方が造血前駆細胞を多く含むことがわかった。2)遺伝子改変マウス胎盤における造血活性c-Myb KOマウス胎仔における造血幹細胞クラスターは正常個体よりも多くの細胞が集塊を形成する像が認められたが、その意義は検証出来ていない。3)胎盤造血幹細胞ニッチの分子的基盤c-Kit陽性造血幹細胞クラスターを取り囲むニッチ細胞を採取し、細胞刺激因子の発現をreal-time PCRで検討した。TPO、G-CSFなどの発現は認められず、SCFのみが高値を示したことから、胎盤造血幹細胞の発生・増幅制御にはSCFが重要な事が示唆された。

这项研究的目的是阐明小鼠和人胎盘造血干细胞的特性以及周围壁ni的造血干细胞的机制。 1）存在于小鼠胎盘中存在的造血干细胞的特征，以研究每个发育阶段胎盘造血干细胞的分布，使用抗C-KIT和抗CD34抗体进行免疫染色。此外，使用流式细胞仪来净化造血干细胞群CD31，CD34和C-KIT阳性细胞，并用KI-67抗体染色它们，以确定细胞周期是否在移动。进一步收集这些细胞，并使用菌落测定法评估造血祖细胞的活性。发现造血干细胞的数量在E11.5时很高，并且在E12.5时的绝对数量很高。还发现，与E11.5相比，E12.5进入细胞周期的细胞较少，并且细胞形态上存在明显的差异，例如E11.5采用更扭曲的形态。此外，菌落分析表明，E12.5含有更多的造血祖细胞。 2）在遗传修饰的小鼠胎盘中造血活性表明，在C-MYB KO小鼠的胎儿中，在造血干细胞簇中发现了比正常个体多的细胞形成的群，但尚未验证其意义。 3）收集了C-KIT阳性造血干细胞簇周围的胎盘造血干细胞生属细胞的分子基础，并通过实时PCR检查了细胞刺激因子的表达。未观察到TPO或G-CSF的表达，并且只有SCF显示高水平，这表明SCF对于控制胎盘造血干细胞的发育和扩增很重要。