全胚胎仔培養を用いた胎仔造血幹細胞肝臓ホーミングメカニズムの解明

利用全胚-胎儿培养阐明胎儿造血干细胞肝脏归巢机制

• 批准号: 18790663
• 负责人: 杉山 大介
• 金额: $ 2.18万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-18790663/
• 关键词: 血液; 発生; 肝臟; 分化; 肝臓

本研究の目的は、マウス胎生期肝臓造血以前に造血活性がある卵黄嚢、大動脈-中腎-生殖隆起(AGM)領域で発生した造血細胞が、血流を介して、いつ、どのように肝臓ヘホーミング(移動・定着)し、どのようなニッチを構築しているか解明する事である。1.胎生期造血幹細胞のFlowcytometry解析胎齢10.5日目AGM領域における表面抗原をFlowcytometryで解析した。免疫染色に-致し、CD31陽性, CD31陽性,c-Kit陽性分画に造血幹細胞が含まれていた。更に詳細に検討したところ、これらの細胞は他の造血幹細胞マーカーであるCD150を68%、EPCRを20-36%、CD41を95%発現していた。この分画における白血球マーカーであるCD45の発現を検討すると、胎齢が進むにつれてCD45陽性細胞が増加する傾向が認められ、造血幹細胞の血球系譜への分化は、胎齢9.5日目から10.5日目と示唆された。2.造血幹細胞肝臓ホーミングに必要な接着因子の同定α鎖の発現を検討したところ、2,3,4,5,6,7,9,vの8種類が検出された。定量的PCRによる解析が必要であり、今後real-time PCRを用いて発現量を検討する予定である。3.新規肝臓ホーミング解析システムの確立.肝臓へどのような細胞がホーミングするか解析するため、Donor胎仔肝臓をRecipient胎仔脳室、あるいは眼窩周辺へ移植し、全胚胎仔培養を行った。一部では血流も認められ、今後遺伝子改変マウスを用いて解析を進める予定である。4.電子顕微鏡解析の取り組みホーミングした造血幹細胞がどのようなニッチ細胞を必要としているか検討するため、Sca-1 GFP Tgマウスを用いて解析中である。

这项研究的目的是澄清卵黄囊中的造血细胞何时以及如何发生在造血性造血性造血性造血性造血作用之前，在小鼠胚胎肝脏中具有造血活性，在小鼠胚胎肝脏中具有造血活性壁ches是构建的。 1。通过流量仪分析了胎儿年龄第10.5天的AGM区域胎儿造血干细胞表面抗原的流量仪分析。造血干细胞包括在CD31阳性，CD31阳性和C-KIT阳性级分中。进一步的检查表明，这些细胞表示68％的其他造血干细胞标记，CD150，EPCR的20-36％和CD41的95％。当在这一小部分中CD45的表达（白细胞标记物的表达）时，随着胎龄的发展，CD45阳性细胞的趋势会增加，这表明造血干细胞从第9.5天到第10.5天。 2。识别造血干细胞所需的粘附因子时，当我们研究α链的表达时，检测到八种类型：2、3、4、5、6、6、7、9和v。定量PCR分析是必要的，将来将使用实时PCR研究表达水平。 3。建立新的肝归巢分析系统。为了分析归巢中的细胞类型，将供体胎儿肝脏植入受体胎儿心室或轨道的外围，并进行整个胚胎培养。在某些情况下，还观察到了血流，将来将使用转基因小鼠进行分析。 4。电子显微镜分析，以研究造成的造血干细胞所需的细胞细胞，使用SCA-1 GFP TG小鼠进行分析。