遺伝子改変マウスを使用した大脳新皮質投射型GABA神経細胞の役割に関する研究

使用转基因小鼠研究新皮质投射 GABA 神经元的作用

• 批准号: 19650085
• 负责人: 玉巻 伸章
• 金额: $ 2.11万
• 依托单位: Kumamoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2007
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2007 至 2008
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-19650085/
• 关键词: NOS; GABA; neocortex; projection; disinhibition; Chop2; Halorhodpsin; 光刺激; tet-on

作成したNOS-Cre/tet-onマウスとHA,Chop2-Cre-reporter mouseの作動確認:本研究では、すでに作成したnNOS-Cre/tet-onマウスとHA,Chop2-Cre-reporter mouseの作動が正確であるかどうかを確認した。それぞれのDNAコンストラクトは、ドキシサイクリン投与まではCreの働きを最低限に抑えられるようにcultured-cellで十分にモニター実験を繰り返したものであった。両者を掛け合わせ生まれたマウスが4週齢以上に成育して、興奮性神経細胞でのnNOS promoter活性が終息した段階に、ドキシサイクリンを常時飲水の中に添加して、bidirectional promoter上のrtTSサプレッサーを除き、rtTA2Mの結合を促してFlpeを発現させ、一週間程度の期間を掛けてnNOS陽性細胞にCreを発現させた。CreはloxPではさまれたmodified red fluorescent protein (mRFP) cDNAを除くことにより、HR,Chop2, YFPがCAG promoterの下流に来て、3つの蛋白発現が始まる事が期待された。さらに2-3日の生存期間をおいて灌流固定し、nNOSとGFPに対する二重免疫組織化学を行い、明らかなGFP陽性でnNOS陰性の細胞が無いことを期待していた。GFP陰性nNOS陽性の細胞は、tet-onからCreによるDNAの組み換えにいたらなかった場合であり、全てが二重染色になるようにドキシサイクリンの投与量と期間を調整した(全てのnNOS陽性細胞のレポーター標識)。しかし、現在までのところtet-on systemが予定通りの頻度で働いておらず、望む実験ができていない。

确认创建的NOS-CRE/TET-ON小鼠和HA，Cre-Cre-Reporter小鼠：在这项研究中，已经创建的NNOS-CRE/TET-ON小鼠和HA的操作激活了Cre-Reporter小鼠。我检查了它是否准确。每种DNA构建体反复监测培养细胞中的实验，以便可以将CRE的工作最小化，直到给予Doxychlin。在两侧出生的小鼠在兴奋性神经细胞中的启动子活性始终将doxychlin添加到吞咽中，并且是双性恋启动子上的RTTS补充剂促进了RTTA2M的键以表达FLPE，并在一周内在NNOS阳性细胞中表达。 CRE预计HR，Chop2和YFP将在CAG启动子的下游，不包括LOXP中改良的红色荧光蛋白（MRFP）cDNA。此外，灌注固定在2-3天的生存中，对NNOS和GFP的双免疫系统化学化学，并希望没有明显的GFP阳性和NNOS阴性细胞。 GFP负NNOS阳性细胞不被Tet-On重组为CRE，并且对Doxychlin的所有剂量和周期都进行了调整，以使它们全部染色（所有NNOS阳性细胞）。但是，迄今为止，Tet-On系统尚未按计划工作，也无法进行实验。

项目成果

Method for single-cell microarray analysis and application to gene-expression profiling of GABAergic neuron progenitors

• DOI: 10.1016/j.neures.2007.12.011
• 发表时间: 2008-04-01
• 期刊: NEUROSCIENCE RESEARCH
• 影响因子: 2.9
• 作者: Esumi, Shigeyuki;Wu, Sheng-Xi;Tamamaki, Nobuald
• 通讯作者: Tamamaki, Nobuald

Anomaly with no right ventral root at the seventh cervical segment in humans: gross anatomical and neuroanatomical study.

人类第七颈段无右腹根的异常：大体解剖学和神经解剖学研究。

• 发表时间: 2007
• 期刊: Anat. Sc. i Int. 82
• 作者: Watanabe;S.;Blaisdell;A.;Huber;L.;Young;A.(編集);Tanahira C;I de Y;Kaneko K;Yamamoto E;Huang J;Basu K;Esumi S;Eiichiro Yamamoto;Basu K.;Esumi S.;Higo S.
• 通讯作者: Higo S.

ドーパミン神経細胞の分離法

多巴胺能神经元的分离方法

• 发表时间: 2007

Exeess salt causes cerebral neuronal apoptosis and inflammation in stroke-pronehypertensive rats, through angiotensin II-induced NADPH oxidase activation.

过量的盐通过血管紧张素 II 诱导的 NADPH 氧化酶激活，导致易中风高血压大鼠的脑神经元凋亡和炎症。

• 发表时间: 2008
• 期刊: Strok (In press)
• 作者: Watanabe;S.;Blaisdell;A.;Huber;L.;Young;A.(編集);Tanahira C;I de Y;Kaneko K;Yamamoto E;Huang J;Basu K;Esumi S;Eiichiro Yamamoto
• 通讯作者: Eiichiro Yamamoto

有用なトランスジェニックマウスを作成するための情報獲得法

建立有用转基因小鼠的信息获取方法

• 发表时间: 2008
• 作者: Watanabe;S.;Blaisdell;A.;Huber;L.;Young;A.(編集);Tanahira C;I de Y;Kaneko K;Yamamoto E;Huang J;Basu K;Esumi S;Eiichiro Yamamoto;Basu K.;Esumi S.;Higo S.;Higo S.;Huang J.;玉巻 伸章;玉巻 伸章
• 通讯作者: 玉巻 伸章