可塑性の高い状態にある樹状突起の可視化の試み

尝试可视化处于高塑性状态的树突

• 批准号: 12053239
• 负责人: 玉巻 伸章
• 金额: $ 1.92万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12053239/
• 关键词: MAP2; 樹状突起

錐体細胞の樹状突起では、基底樹状突起、先端樹状突起に対する入力は異なり、入力の細胞体部軸索起始部への影響も異なる。先端樹状突起の側枝は特にスパインが多く、入力受容に重要な働きをしている。しかしこのような樹状突起の形態の違いを生み出す仕組みは、微小管と微小管結合蛋白Microtubule Associating Protein(MAP)の働きにより調節されているという程度に、漠然としか理解されていない。申請者は、胎児期大脳新皮質中間帯を接線方向に移動する神経細胞の研究において、免疫組織化学とin situ hybridizationで、同移動神経細胞がMAP2abc陽性MAP2ab陰性となっていることから、MAP2のa,b,c,dのサブタイプのうち低分子量のMAP2cのみを発現していることを発見した(Fujimori et al.,2001)。この移動細胞は、先導突起と細胞体部がMAP2c陽性であるが、先導突起は常に伸縮を繰り返すと同時に分枝も盛んに作り、その形態を変えている。このような移動細胞での観察結果から、微小管とMAP2cが形作る突起は、可動性、可変性が高いことが考えられる。同様の固定法と染色法で、成体マウスの大脳皮質を染色し、MAP2cを含有すると思われる樹状突起の分布を調べたところ、様々なところに局在していることが分かった。神経シナプス伝達において、顕著な可塑性を示す領域と一致してMAP2cの分布があるので、MAP2c分子の分布を可視化することは、ある種の高度な可塑的性質を示す樹状突起の可視化につながる可能性が有る。これまでにMAP2cなどの低分子MAP2の分布を調べる方法として、二種類の抗体による陽性領域の差を取る方法以外に、二つのexonの繋ぎ目に対する抗体を作成する方法、in situ RT-PCR法を確立してMAP2c mRNAの分布を直接探る方法、確立しようとしている。また、それぞれの低分子MAP2 splicing variantをアデノウイルスを使って強制発現させたときの、樹状突起形態変化の観察も試みている。

在锥体细胞的树突中，基底和顶端树突的输入不同，输入对体细胞轴突起源的影响。顶端树突的侧支链在棘中特别大，并且在输入接收中起着重要作用。然而，只有隐约地理解，在树突形态上产生这种差异的机制受微管关联蛋白（MAP）的作用来调节。在一项对通过胎儿新皮质中区向切向迁移的神经元的研究，申请人发现，通过免疫组织化学和原位杂交，相同的迁移神经元是MAP2ABC阳性MAP2AB-MAP2AB阴性，因此仅表达了低分子量MAP2C的低分子量MAP2C，b，b，c，c，d s s s s s s e e nim fuj c，fuj s fuj s fuj s fuj s fuj s fuj s fuj s fuj s fuj s fuj s fuj c，fuj。这些迁移细胞的主要突起和细胞体是MAP2C阳性的，但是领先的突起不断扩展和收缩，与此同时，它们会积极地形成分支，改变其形态。从这些对迁移细胞的观察结果，可以认为MAP2C形成的微管和突起是高度移动和可变的。相同的固定和染色方法染色了成年小鼠的大脑皮层，并检查了似乎包含MAP2C的树突的分布，并发现它们位于各个地方。因为在神经突触传播中，MAP2C的分布与表现出明显可塑性的区域一致，因此可视化MAP2C分子的分布可能会导致具有某些高塑料特性的树突的可视化。到目前为止，除了通过两种类型的抗体获得阳性区域的差异外，我们还一直在尝试建立一种研究小分子MAP2（例如Map2c）的分布的方法，我们还一直在尝试建立一种对两个外显子的抗体以及一种原位RT-PCR方法创建抗体的方法，以直接探索MAP2C mRNA的分布。当每个小分子MAP2剪接变体被迫使用腺病毒表达时，我们还尝试观察树突形态的变化。

项目成果

Tamamaki,N.,Nakamura,K.,and Kaneko,T.: "Cell migration from the corticostriatal angle to the basal telencephalon in rat embryos."Neuroreport. 12(印刷中). (2000)

Tamamaki, N.、Nakamura, K. 和 Kaneko, T.：“大鼠胚胎中从皮质纹状体角到基底端脑的细胞迁移”（Neuroreport）（2000 年）。

Fujimori,K.,Takeuchi,K.,Yazaki,T.,Uemura,K.,Nojyo,Y.,and Tamamaki,N.: "Expression of L1 and TAG-1 in the corticospinal callosal, and hippocampal commissuralneurons the developing rat telencephalon as revealed by retrograde and in situ hybridization double

Fujimori,K.、Takeuchi,K.、Yazaki,T.、Uemura,K.、Nojyo,Y. 和 Tamamaki,N.：“发育中的大鼠皮质脊髓胼胝体和海马连合神经元中 L1 和 TAG-1 的表达

Tamamaki,N.,Nakamura,K.,Furuta,T.,Asamoto,K.,and Kaneko,T.: "Neurons in Golgi-stain-like images revealed by GFP-adenovirus infection in vivo."Neurosci Res.. 38. 231-236 (2000)

Tamamaki,N.、Nakamura,K.、Furuta,T.、Asamoto,K. 和 Kaneko,T.：“体内 GFP 腺病毒感染揭示的高尔基染色样图像中的神经元。”Neurosci Res.. 38