カーボンナノチューブセンサーによる肝特異的酸化リポ蛋白の測定

使用碳纳米管传感器测量肝脏特异性氧化脂蛋白

• 批准号: 17659397
• 负责人: 千葉 仁志
• 金额: $ 1.86万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 2006
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-17659397/
• 关键词: 酸化リボ蛋白; 肝不全; モノクロナル抗体; カーボンナノチューブ; 酸化リポ蛋白

肝不全患者血清から超遠心法とゲルろ過法により分離した肝特異的酸化リボ蛋白をマウスに免疫し、ハイブリドーマを作製し、同リボ蛋白に対する抗体を産生するクローン数個を得た。そのうち、金属酸化LDLや正常LDLとは反応しない抗体を産生するクローン1個を選択した。本クローンの抗体は肝不全患者LDL画分と強く反応したが、正常者や高脂血症患者ではほとんど反応せず特異性に優れていた。また、同リボ蛋白をウサギに免疫して抗血清を得た。本ポリクロナル抗体を親和性クロマトグラフィーにより精製した特異抗体は、同モノクロナル抗体とのサンドイッチ酵素免疫測定にも応用でき、肝不全患者で著しく高い反応を示した。また、胆汁うっ滞患者や中等度の肝不全患者でも反応がみられ、肝特異的酸化リボ蛋白の出現する病態に関して示唆を得ることができた。一方、本モノクロナル抗体をカーボンナノチューブセンサーへと組み込むことについては、抗体遺伝子の可変領域遺伝子cDNAをクローニングし、さらに発現ベクターへと組み込むことにより、抗体を大量に調製することができるようになった。同抗体をカーボンナノチューブセンサーの検出基板のバックゲートに固定化したところ、肝特異的酸化リボ蛋白と迅速に反応し、高感度の検出が可能であった。以上から、肝特異的酸化リボ蛋白に対するカーボンナノチューブセンサーによる測定の基本的検討は完了し、今後は実用化に向けた研究を行う予定である。

我们通过超速离心和凝胶过滤从肝衰竭患者的血清中分离出肝脏特异性氧化核糖蛋白，对小鼠进行免疫接种，产生杂交瘤，并获得了几个产生抗核糖蛋白抗体的克隆。其中，选择了一个克隆，该克隆产生的抗体不与金属氧化的低密度脂蛋白或正常低密度脂蛋白发生反应。该克隆的抗体与肝衰竭患者的LDL部分发生强烈反应，但与正常受试者或高脂血症患者几乎没有反应，显示出优异的特异性。另外，用相同的核糖蛋白免疫兔子以获得抗血清。通过亲和层析纯化该多克隆抗体获得的特异性抗体可应用于与相同单克隆抗体的夹心酶免疫测定，并且在肝衰竭患者中表现出显着高的反应。在胆汁淤积患者和中度肝衰竭患者中也观察到了反应，从而深入了解肝脏特异性氧化核糖蛋白出现的病理状况。另一方面，为了将该单克隆抗体整合到碳纳米管传感器中，可以通过克隆抗体基因的可变区基因cDNA并将其进一步整合到表达载体中来制备大量抗体。 。当将相同的抗体固定在碳纳米管传感器检测基板的后门上时，它会与肝脏特异性氧化核糖蛋白快速反应，从而实现高灵敏度检测。基于此，利用碳纳米管传感器测量肝脏特异性氧化核糖蛋白的基础研究已经完成，我们计划在未来进行实际应用的研究。

项目成果

Evaluation of risk for atherosclerosis in Alagille syndrome and progressive familial intrahepatic cholestasis: Two congenital cholestatic diseases with different lipoprotein metabolisms

• DOI: 10.1016/j.jpeds.2004.10.047
• 发表时间: 2005-03-01
• 期刊: JOURNAL OF PEDIATRICS
• 影响因子: 5.1
• 作者: Nagasaka, H;Yorifuji, T;Kobayashi, K
• 通讯作者: Kobayashi, K

Improved HPLC assay for lipid peroxides in human plasma using the internal standard of hydroperoxide

• DOI: 10.1007/s11745-005-1412-2
• 发表时间: 2005-05-01
• 期刊: LIPIDS
• 影响因子: 1.9
• 作者: Hui, SP;Murai, T;Kurosawa, T
• 通讯作者: Kurosawa, T