小胞構成蛋白の網羅的解析による糖輸送担体の制御機構および糖尿病における障害の解明

通过囊泡组成蛋白的综合分析阐明糖转运载体和糖尿病疾病的控制机制

基本信息

批准号：
17659273
负责人：
浅野知一郎
金额：
$ 1.92万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

GLUT4、LDL受容体、インスリン受容体含有小胞特異的蛋白の構造及び機能の解析GLUT1及びGLUT4のC末端にMEFタグを取り付けた蛋白をコードするcDNAを作成し、これらを発現するアデノウイルスを作製した。これを3T3-L1脂肪細胞や培養筋肉細胞に発現させ、MEFタグによって、高純度の蛋白含有小胞を精製する計画であったが、局所へのアデノウイルス注入で、高い効率での発現が容易には得られなかった。そこで、LacZのアデノウイルスを用い、多くの条件で検討することによって、副睾丸上脂肪組織全体に高い効率で発現させる条件を樹立できた。これから、GLUT1及びGLUT4を脂肪組織に発現させる検討を行う段階である。GLUT1とGLUT4が細胞内で際だって異なる分布を示すことから、脂肪細胞から特異的な含有小胞を分離できれば、有望な計画である。この困難点は、脂肪細胞に高い効率で発現させることである。我々は、この困難を克服するために、LacZのアデノウイルスを多くの条件でマウス脂肪組織に導入し、ついに、副睾丸上脂肪組織全体に比較的高い発現を得る条件設定を得た。しかし、1年間という短い期間にしては、研究は進展し、これからの成果が楽しみな状況になっており、今後も最善の努力を行っていきたいと考えている。

分析含有GLUT4，LDL受体和胰岛素受体的囊泡特异性蛋白的结构和功能。制备了编码与GLUT1和GLUT4 C端的MEF标签的cDNA编码蛋白质，制备了表达这些表达的腺病毒。计划在3T3-L1脂肪细胞和培养的肌肉细胞中表达这一点，并使用MEF标签纯化含蛋白质的囊泡，但是局部注入腺病毒并未轻易提供高效率表达。因此，通过使用LACZ腺病毒并在许多条件下检查它，我们能够建立在上层迪氏菌中的整个脂肪组织中表达高效率的条件。从现在开始，我们将在脂肪组织中对表达glut1和glut4进行研究。鉴于GLUT1和GLUT4在细胞内表现出独特的分布，因此将特定含有囊泡的特定囊泡与脂肪细胞分离出来。困难是它在效率高的脂肪细胞中表达。为了克服这一困难，我们在许多条件下将LACZ腺病毒引入了小鼠脂肪组织中，并最终达到了一个有条件的环境，该设置在整个上肾上腺皮质脂肪组织中产生了相对较高的表达。但是，在短短一年的时间里，研究进展了，我们期待看到未来的结果，我们希望在未来继续尽力而为。