プロテオーム解析によるインスリン感受性調節機構の解明と新規治療ターゲットの発見

通过蛋白质组分析阐明胰岛素敏感性调节机制并发现新的治疗靶点

基本信息

批准号：
17019010
负责人：
浅野知一郎
金额：
$ 2.88万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

I.インスリン作用や糖・脂質代謝に重要な蛋白の修飾や結合蛋白の同定まず、IRS-1、IRS-2、p110αとp110β、Akt、GSK3β、PTEN、calpain 10、c/EBPα、PPARα、PPARγ、FOXO1、AMPK、LKB1等について、MEF tagを取り付けたcDNAコンストラクトを作成し、アデノウイルスで発現させることに成功した。これらは、アデノウイルスを静脈注射することで、マウスの肝臓に発現させた後、MEFタグを用いて複合体を精製し、LC-MS/MSを用いて、解析を行った。データベース(Masccot)に照合したところ、いずれのタンパクについても、複合体に含まれる可能性のあるタンパクとして100から250程度が同定された。同時にこれらのbaitタンパクを安定的に発現するHEpG2細胞を作成し、これを用いた結果と比較することで、重要なタンパクの結合を同定しようと努力を続けている状況である。II.GLUT4、LDL受容体、インスリン受容体含有小胞特異的蛋白の構造及び機能の解析GLUT1及びGLUT4のC末端にMEFタグを取り付けた蛋白をコードするcDNAを作成し、これらを発現するアデノウイルスを作製した。これを3T3-L1脂肪細胞や培養筋肉細胞に発現させ、MEFタグによって、高純度の蛋白含有小胞を精製する計画であったが、局所へのアデノウイルス注入で、高い効率での発現が容易には得られなかった。そこで、LacZのアデノウイルスを用い、多くの条件で検討することによって、副睾丸上脂肪組織全体に高い効率で発現させる条件を樹立できた。これから、GLUT1及びGLUT4を脂肪組織に発現させる検討を行う段階である。

I.修饰蛋白质对胰岛素作用和糖和脂质代谢以及结合蛋白的鉴定很重要。我们使用MEF标签创建了IRS-1，IRS-2，P110α和P110β，AKT，GSK3β，PTEN，PTEN，CALPAIN 10，C/EBPα，PPARα，PPARγ，PPARγ，PPARγ，AMPK，LKB1等，并成功地表达了它们，并成功地表达了它们。这些是通过静脉注射腺病毒在小鼠的肝脏中表达的，然后使用MEF标签纯化复合物，并使用LC-MS/MS进行分析。与数据库（MASCCOT）相比，将大约100至250种蛋白质鉴定为所有蛋白质中可以包含的蛋白质。同时，我们继续努力通过创建稳定表达这些诱饵蛋白并将其与使用结果进行比较的HEPG2细胞来识别重要的蛋白质结合。 ii。分析含有GLUT4，LDL受体和胰岛素受体的囊泡特异性蛋白的结构和功能。制备了编码带有MEF标签的蛋白质的cDNA，制备了连接到Glut1和Glut4的C端的蛋白质，并产生了表达这些的腺病毒。计划在3T3-L1脂肪细胞和培养的肌肉细胞中表达这一点，并使用MEF标签纯化含蛋白质的囊泡，但是局部注入腺病毒并未轻易提供高效率表达。因此，通过使用LACZ腺病毒并在许多条件下检查它，我们能够建立在上层迪氏菌中的整个脂肪组织中表达高效率的条件。从现在开始，我们将在脂肪组织中对表达glut1和glut4进行研究。