B型肝炎ウイルスのコードするmicroRNAの検索

寻找乙型肝炎病毒编码的microRNA

• 批准号: 17659219
• 负责人: 岡上 武
• 金额: $ 2.11万
• 依托单位: Kyoto Prefectural University of Medicine
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 2006
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-17659219/
• 关键词: B型肝炎; microRNA; 肝癌細胞株; B型肝炎ウイルス; micro RNA

(1)microRNAのライブラリー作成HBVゲノムが組み込まれている肝癌細胞株を用いることで、肝癌組織に存在するB型肝炎ウイルスゲノムからmicroRNAをスクリーニングした。すなわち、肝癌細胞株から、17〜25塩基のRNAをアクリルアミド・ゲルで抽出し、5'、3'端にアダプターを付加後、逆転写反応を行いcDNAを作成し、制限酵素配列(BanI)を付加したプライマーでPCR反応後、制限酵素切断、ライゲーションした。500-1,000塩基の断片を抽出、tailing後、TA cloningにてライブラリーを作成した。(2)HBVのゲノムにコードされたmicroRNAの塩基配列の決定ライブラリーの数百のバクテリア・コロニーからプラスミドを精製し、挿入された塩基配列を決定し、アダプターに挟まれた17〜25塩基配列が、HBVのゲノム配列と相同性を持つかどうかに関して検索した。(3)HBVのゲノムにコードされたmicroRNAの発現の検討昨年に引きつづき、相同性を持つ塩基配列を含む近傍のHBVゲノムがstem loop構造を取りうること、相同性を持つ塩基配列が肝癌細胞株で発現があることを調べるべく実験を予定したが、肝癌からHBVのゲノム配列と相同性を持つ塩基配列は得られなかった。ヒト肝癌組織やB型肝炎患者肝組織から(1)〜(3)と同様の検討を今後改めて行う予定にしており、今回の肝癌細胞株を用いた検討は今回で終了とする。

（1）使用结合HBV基因组的肝癌细胞系创建microRNA文库，从肝癌组织中存在的丙型肝炎病毒基因组中筛选MicroRNA。也就是说，从丙烯酰胺凝胶上的肝瘤细胞系中提取RNA的17至25个碱基，在将适配器添加到5'和3'末端后，进行了逆转录反应以创建cDNA，并在PCR反应后用限制酶序列（BANI）进行primer反应（BANI），限制性enzeme claivage and litiation claivage和litivation claivage和litiation。提取并尾部提取了500-1,000个基部的片段，并通过克隆创建了库。 （2）从图书馆中的数百个细菌菌落中纯化了在HBV基因组质粒中编码的microRNA的碱基序列，并确定了插入的核苷酸序列，并进行了搜索以确定夹层的17-25碱基序列是否具有HBV基因组序列的同源性。 (3) Examination of the expression of microRNA encoded in the HBV genome Following on from last year, we planned an experiment to investigate whether the nearby HBV genome containing the base sequence with homology can have a stem loop structure, and that the base sequence with homology is expressed in liver cancer cell lines, but no base sequence with homology with homology with HBV genome sequence was obtained from liver cancer.我们计划在乙型肝炎患者的人肝癌组织和肝组织中对（1）至（3）进行类似的研究，以后再次进行肝炎的患者，现在使用肝癌细胞系进行了这项研究。