肝細胞で高発現する新しいレトロウイルスベクターの開発

开发在肝细胞中高表达的新型逆转录病毒载体

基本信息

批准号：
11877093
负责人：
岡上武
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Kyoto Prefectural University of Medicine
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至 2000
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11877093/
关键词：
レトロウイルスベクター LTR 肝臓レトロウイルス肝癌細胞株

项目摘要

SFFVp,MoMuLV,両者のキメラLTRを持つレトロウイルスベクターのマウス肝臓由来の細胞株での遺伝子発現の比較昨年の検討では、三種類の肝癌細胞株に対して、SFFVp,MoMuLV,および両者のキメラLTRをプロモーターとする10種類のCATベクターを用いてマーカー遺伝子を一過性に導入し、それぞれの転写活性を比較検討した。いくつかのキメラLTRをプロモーターとするCATベクターにおいては、MoMuLVのみならずSFFVpのLTRをプロモーターとするCATベクターよりも高い転写活性が示された。しかしながら、今回のレトロウイルスベクターによる三種類の肝癌細胞株に対するマーカー遺伝子の導入の検討では、昨年のCATベクターを用いた一過性の結果と十分に合致するような結果は得られなかった。SFFVp,MoMuLV,両者のキメラLTRを持つレトロウイルスベクターのマウス肝組織内での遺伝子発現の比較従って、SFFVpとMoMuLVの二種類レトロウイルスベクターのみにより、マウスの肝組織にin vivoで導入した遺伝子の発現を検討した。マーカー遺伝子の発現をこの2者で検討するため、新たに、LacZおよびCAT遺伝子を組み込んだレトロウイルスベクターを作成した。肝組織内でのLacZ遺伝子の発現は免疫染色の染色性で、また、肝組織内のCAT遺伝子の発現は肝組織ホモゲネート中のCAT蛋白をELISAで測定することにより比較した。LacZ染色においては、SFFVpベクターを用いた場合には、MoMuLVベクターを用いた場合に比べて高い染色性を示した。さらに、CAT蛋白のELISAにおいても、SFFVpベクターを用いた場合にはMoMuLVベクターを用いた場合に比べて高い値が示された。

在去年的研究中，使用SFFVP，MOMULV和Chimeric LTR的SFFVP，MOMULV和Chimeric LTR的基因表达比较，在去年的研究中，使用SFFVP，MOMULV和Chimimeric LTRS和每种透视活动的10种类型的肝癌细胞系暂时引入标记基因。与启动子使用几个嵌合LTR相比，与启动子的CAT载体相比，与启动子的CAT向量不仅具有MOMULV，而且还具有SFFVP LTR。但是，当前关于使用逆转录病毒载体将标记基因引入三种类型的肝癌细胞系的研究并未提供与去年使用CAT矢量的瞬时结果相一致的结果。研究了在小鼠肝组织中携带两个嵌合LTR的逆转录病毒载体的基因表达的比较。因此，仅使用两种类型的逆转录病毒载体SFFVP和MOMULV引入体内引入基因的表达。为了研究标记基因在两者中的表达，创建了一个新的逆转录病毒载体，结合了lacz和cat基因。 LACZ基因在肝组织中的表达是可免疫染色的，并且通过通过ELISA测量肝组织中的CAT蛋白来比较猫基因在肝组织中的表达。在LACZ染色中，当使用SFFVP载体时，染色高于使用MOMULV载体时。此外，在CAT蛋白的ELISA中，使用SFFVP载体时，显示的值比使用MOMULV载体时更高。