HCV core蛋白を標的とした新たな遺伝子治療戦略の可能性

针对 HCV 核心蛋白的新基因治疗策略的可能性

基本信息

批准号：
15659175
负责人：
岡上武
金额：
$ 1.92万
依托单位：
Kyoto Prefectural University of Medicine
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2004
项目状态：
已结题

项目摘要

昨年度は基礎的検討として、肝癌細胞株HuH7に対して癌遺伝子G(G)-siRNAをtransientにover-expressionさせる実験とレトロウイルスベクターによるG-siRNA導入実験を行った。Transientの発現実験では、G-siRNAがover-expressionした肝癌細胞株HuH7では、コントロールと比べてHuh7細胞数が有意に低下することが明らかとなった。その機序としては、Annexin VとsubG1陽性細胞の増加、すなわち、アポトーシスの関与が考えられた。レトロウイルスベクターによりG-siRNAを導入したHuh7細胞を用いた実験でも同様の実験結果が得られている。以上の結果より、C型肝炎ウイルス(HCV)-siRNAを発現させる実験に用いる系が確立したと考えた。従って、本年度は実際にC型肝炎ウイルス(HCV)-siRNAを肝癌細胞株で発現させる実験を計画した。すなわち、肝癌細胞株HuH7においてHCV-siRNAをtransientにover-expressionさせる実験とレトロウイルスベクターによる肝癌細胞株HuH7へのHCV-siRNA導入実験を行った。しかし、いずれの実験系においても、HCV-siRNAの発現は確認できなかった。現在、種々の肝癌細胞株PLC/PRF/5,Huh7,HepG2,HLEやその他の細胞株Hela細胞,HEK293などでHCV-siRNAを発現させるのみならず、その発現がP53やMDM2などの癌遺伝子や癌抑制遺伝子の動態に及ぼす影響を検討している。

去年，作为一项基础研究，我们进行了一项实验，其中癌细胞g（g）-SiRNA对肝癌细胞系HUH7瞬时过表达，并使用逆转录病毒载体引入G-SiRNA进行了实验。 Transient的表达实验表明，与对照组相比，G-SIRNA过度表达的肝癌细胞系HUH7显着减少了HuH7细胞的数量。该机制被认为是膜联蛋白V和subG1阳性细胞的增加，即参与凋亡。在实验中，使用使用逆转录病毒载体引入的HUH7细胞也获得了类似的实验结果。基于上述结果，人们认为已经建立了一个系统，用于表达丙型肝炎病毒（HCV）-SIRNA的实验。因此，今年我们计划了一个实验，其中丙型肝炎病毒（HCV）-SiRNA实际上在肝癌细胞系中表达。也就是说，进行了一个实验，其中HCV-SIRNA在肝癌细胞系HUH7中瞬时过表达，并进行了一个实验，其中使用逆转录病毒载体将HCV-SIRNA引入HCV-SIRNA中。但是，在任何一个实验系统中均无法确认HCV-SIRNA的表达。目前，我们正在研究HCV-SIRNA不仅在各种肝癌细胞系PLC/PRF/5，HUH7，HEPG2，HLE和其他细胞系HEK293中表达，还研究了其表达对p53和MDM2和MDM2和Tumor抑制基因的癌基因动力学的影响。