Naチャンネル制御遺伝子導入システムによる高血圧症に対する革新的分子治療法の開発

利用Na通道控制的基因转移系统开发高血压的创新分子疗法

基本信息

批准号：
16659224
负责人：
荻原俊男
金额：
$ 2.24万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2005
项目状态：
已结题

项目摘要

高血圧症発症の分子メカニズムには多因子が複雑に関与しており未だ解明されておらず、詳細な分子機構の解明とそれに基づく新たな分子療法の開発が期待されている。本研究では遠位尿細管におけるナトリウムチャンネル関連遺伝子に注目し、アンチセンスストラテジーでこれら遺伝子の働きを阻害し、高血圧治療につなげることを目的とした。FITCでラベルしたオリゴヌクレオチドをnakedタイプでカテーテルを用いて腎動脈から動注したが、遠位尿細管での明らかなFITC発色は認められず、導入を確認できなかった。さらにHVJ-envelope法を用いた同アプローチにおいてもFITC発色を遠位尿細管で確認できず、ベクターを用いても動注のアプローチでは困難であった。尿細管細胞に直接接触しうるアプローチとして膀胱からの逆行性導入を検討。末梢をクランプして膀胱に注入し、逆行性に流入させることで、HVJ-envelope法で封入したオリゴヌクレオチドの尿細管細胞への取り込みが一部確認できた。ラットWNK4のアンチセンスオリゴヌクレオチド(Positions+4 to +22 of rat sequence(Prkwnk4))を作成し、ダール食塩感受性高血圧ラットに同法で導入したが、尿中Na排泄の上昇や血圧上昇の抑制は確認できなかった(0.3% salt diet;110+8mmHg、8% salt diet;142+6mmHg、8%+antisense;150+8mmHg)。これら結果は導入効率(activityとefficiency)の低さに起因すると考えられた。

高血压发生的分子机制涉及多种因素，复杂且尚未阐明，人们对阐明详细的分子机制以及基于此开发新的分子疗法寄予厚望。在本研究中，我们关注远端肾小管中钠通道相关基因，旨在利用反义策略抑制这些基因的功能，从而治疗高血压。使用裸导管经肾动脉动脉内注射FITC标记的寡核苷酸，但在远端肾小管中未观察到明显的FITC显色，无法确认引入。此外，即使采用与HVJ-envelope方法相同的方法，也无法在远端小管中确认FITC显色，并且即使使用载体，也很难使用动脉注射方法。考虑从膀胱逆行引入作为一种允许与肾小管细胞直接接触的方法。通过夹住外周，将其注射到膀胱中并使其逆行，我们能够确认使用HVJ-包膜法封装的一些寡核苷酸被摄入肾小管细胞中。我们创建了大鼠WNK4反义寡核苷酸（大鼠序列的位置+4至+22（Prkwnk4）），并使用相同的方法将其引入Dahl盐敏感性高血压大鼠中，但它并没有抑制尿Na排泄的增加或增加无法确认血压（0.3%盐饮食；110+8mmHg，8%盐饮食；142+6mmHg，8%+反义；150+8mmHg）。这些结果被认为是由于引入效率（活性和效率）低所致。