必須微量元素セレン・トランスポーター受容体の同定と取り込み機構の解析

必需微量元素硒转运蛋白受体的鉴定及摄取机制分析

基本信息

批准号：
16659033
负责人：
高橋和彦
金额：
$ 2.24万
依托单位：
Hokkaido Pharmaceutical University School of Pharmacy (2005)Hokkaido University (2004)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2005
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16659033/
关键词：
セレン必須微量元素トランスポーターセレノプロテインP

项目摘要

Seトランスポーターの運搬・取り込み機構の解析Jurkat細胞に可変量の放射標識SePを加え,4℃で1時間反応した.反応終了後,細胞への結合量を測定し,スキャッチャードプロットを行った.その結果,SePに対する受容体の数は2,200±1,500per cell (n=4,mean±SEM),解離定数Kdは0.67±0.33nMと求められた.また,放射標識SePとJurkat細胞を反応後,架橋試薬を加えた試料についてSDS-PAGEとオートラジオグラフィで解析を行い,SeP受容体の存在を調べた.その結果,架橋試薬disuccinimidyl suberateと反応した場合,試薬無しで見られた66KDaのバンド(SePに由来)は消失し179KDaのバンドが新たに出現した.500倍量の非標識SePを共存するとこのバンドは消失することから,この反応が特異的であることが確認された.両者の差,すなわち110KDaのSeP受容体の存在が示された.SePがJurkat細胞にSeを供給していることを確かめるため,細胞と放射標識SePを37℃で3日間培養後,細胞内のSe含有蛋白質の新規合成が行われているかSDS-PAGEとオートラジオグラフィで解析を行った.55,23,20及び15kDaのバンドが認められ,これらのバンドが抗SeP抗体で免疫沈降されないことから,新規Se含有蛋白質の合成が確認された.以上の結果から,SeP受容体の存在とSePがこの受容体を介して細胞内にSeを供給していることが証明された.SeP受容体の同定の試みSeP不溶化カラムにJurkat細胞膜画分を添加後,結合物の回収・分析を試みた.しかし,構造解析などの分析に十分な量の試料を確保することが出来なかった.今後,より多量の膜画分を用いるなど工夫を加えて,最終的にSeP受容体の同定を目指す予定である.

分析SE转运蛋白的运输机理和摄取机理，将可变量的放射性标记的SEP添加到Jurkat细胞中，并在4°C下反应1小时。反应完成后，测量了与细胞的结合量，并进行了SCATCHARD图。结果，确定SEP的受体数量为每个细胞2,200±1,500（n = 4，平均值±SEM），离解常数KD为0.67±0.33 nm。此外，在反应放射性标记的SEP与Jurkat细胞反应后，使用SDS-PAGE和放射自显影分析了具有交联试剂的样品，以研究SEP受体的存在。结果，发现交联试剂二核酰亚胺基是交联试剂。当与Suberate反应时，发现没有试剂的66kDa频带（源自SEP）消失了，并且出现了179kDa频段。当未标记的SEP共存500倍的500倍时，该带消失了，表明该反应是特异的。显示了两者之间的差异，即110KDA SEP受体的存在。 To confirm that SeP was supplying Se to Jurkat cells, cells and radiolabeled SeP cultured at 37°C for 3 days, and then analysed whether a new synthesis of the intracellular Se-containing protein was carried out.55 23, 20 and 15 kDa bands were observed, and these bands were not immunoprecipitated with anti-SeP antibodies, and the synthesis of novel Se-containing proteins was 确认的。上面的结果表明，SEP受体的存在和SEP通过该受体向细胞提供SE。在将Jurkat细胞膜分数添加到SEP不溶性柱中后，试图识别SEP受体，我们试图恢复和分析结合物。但是，我们无法获得足够数量的样本进行分析，例如结构分析。将来，我们计划使用大量的膜分数最终识别SEP受体。

项目成果

期刊论文数量（9）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

Selenoprotein expression in Hurthle cell carcinomas and in the human Hurthle cell carcinoma line XTC.UC1.

Hurthle 细胞癌和人 Hurthle 细胞癌细胞系 XTC.UC1 中硒蛋白的表达。

DOI：
发表时间：
2005
期刊：
Thyroid 15
影响因子：
0
作者：
Sawada;H.;Akasaka;M.;Yokota;N.;Sakai;N.;M.Menth
通讯作者：
M.Menth

Rapid formation of 4-hydroxy-2-nonenal, malondialdehyde, and Phosphatidylcholine aldehyde from phospholipids hydroperoxide by hemoproteins.

血红素蛋白从磷脂过氧化氢快速形成 4-羟基-2-壬烯醛、丙二醛和磷脂酰胆碱醛。

DOI：
发表时间：
2004
期刊：
Free Radic.Biol.Med. 36
影响因子：
0
作者：
Yan;Y.;et al.;T.Hayashi
通讯作者：
T.Hayashi

Relationship of coffee consumption with risk factors for atherosclerosis in rats.

咖啡摄入量与大鼠动脉粥样硬化危险因素的关系。

DOI：
发表时间：
2005
期刊：
Ann.Nutr.Metab. 49
影响因子：
0
作者：
Kubota;K.et al.;Kobayashi T et al.;W.Sakamoto
通讯作者：
W.Sakamoto

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高橋和彦其他文献

G-CSFによる DOX の心筋毒性の抑制

G-CSF 抑制 DOX 心肌毒性

DOI：
发表时间：
2014
期刊：
影响因子：
0
作者：
中山華穂;三田雄一郎;吉岡佑弥;西藤有希奈;高橋和彦;野口範子;斎藤芳郎;辻田賢一，小川久雄;三田　雄一郎，的場　聖明，星野　温，中岡　幹彦，片村　真紀，足立　壮一，金井　恵理
通讯作者：
三田　雄一郎，的場　聖明，星野　温，中岡　幹彦，片村　真紀，足立　壮一，金井　恵理