HIV-I構成蛋白やセレン含有蛋白の翻訳に必須な新規RNA結合因子の探索

寻找翻译HIV-1组成蛋白和含硒蛋白所必需的新型RNA结合因子

基本信息

批准号：
07808068
负责人：
高橋和彦
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Hokkaido University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07808068/
关键词：
セレン RNA結合因子翻訳グルタチオンペルオキシダーゼ

项目摘要

Secは終止コドンUGAでコードされているが,真核生物におけるSecの取り込み機構は現在不明である.Sec含有蛋白のmRNA3′UTRには,stem-loop構造をとり得る配列が存在しており,この構造内にSecの取り込みに必須と考えられる配列(Sec insertion sequence;SECIS)が共通して認められる.今回,我々はこのSECISを含むmRNA3′UTRに結合する細胞質因子の検索を行った.Sec含有蛋白であるヒト細胞質型グルタチオンペルオキシダーゼ(cGPx)のmRNA3′UTR全長213baseを^<32>Pで標識し,CHO細胞の細胞質画分と反応させた.この反応物にUVを照射してSDS-PAGEを行い,オートラジオグラフィーにより解析したところ,約50KDaの位置に単一のバンドが検出された.また,stem-loop部分単独89baseを用いた場合にも同じ位置に単一のバンドが認められた.これらの結果より、細胞質に3′UTRのstem-loop部分と特異的に結合する因子の存在することが初めて示唆された.検討したうち最もSECIS RNA結合蛋白含量の多いラット肝細胞質を出発材料として本因子の精製を試みた.まず末端をbiotin化したRNAを合成し、これを出発材料と反応した.その後,avidinを不溶化したアガロースと反応し,目的とするRNA結合因子を分離した.現在,分析スケールから精製スケールに試料を大量に処理しており,精製に成功したら,その生化学的性質を調べる予定である.

SEC由停止密码子UGA编码，但是当前未知真核生物中SEC吸收的机制。含SEC蛋白的mRNA3'UTR具有可以采用干循环结构的序列，在这种结构中，人们认为它对于SEC摄取至关重要（SEC插入）。通常观察到SECIS。在这项研究中，我们搜索了与含有sec的mRNA3'UTR结合的细胞质因子。用 ^<32> p标记了含Sec的蛋白质人类细胞质谷胱甘肽（CGPX）的mRNA3'UTR总长度213Base，人类细胞质谷胱甘肽过氧化物酶（CGPX），并与CHO细胞的细胞质分数反应。该反应被紫外线和SDS-PAGE辐照，并通过放射自显影分析，在约50 kDa的位置检测到单个条带。此外，仅使用茎环部分时，在同一位置发现了一个带。这些结果首次表明，特异性结合3'UTR的茎环部分的因子存在于细胞质中。在大多数研究中，研究了SECIS。我们试图使用具有高RNA结合蛋白含量作为起始材料的大鼠的肝细胞质纯化这一因素。首先，我们用生物素化末端合成RNA，并与起始材料反应。之后，阿维丁与琼脂糖反应，该琼脂糖已使琼脂糖分离靶RNA结合因子。目前，我们正在将大量样品从分析量表处理到纯化量表，一旦纯化成功，我们计划研究其生化特性。

项目成果

期刊论文数量（7）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

K.Takahashi: "Callular Glutathione Peroxidase" Human Protein Data. 2. (1995)

K.Takahashi：“Callular 谷胱甘肽过氧化物酶”人类蛋白质数据。

DOI：
发表时间：
期刊：
影响因子：
0
作者：
通讯作者：

Y.Yamamoto: "Enzmyme-Linked Immunosorbent Assay for Extracellular Glutathione Peroxidase." Clin.Chem.Acta. 236. 93-99 (1995)

Y.Yamamoto：“细胞外谷胱甘肽过氧化物酶的酶联免疫吸附测定。”

DOI：
发表时间：
期刊：
影响因子：
0
作者：
通讯作者：

高橋和彦: "ヒト細胞外型グルタチオンペルオキシダーゼの構造と機能" フリーラジカルの臨床. 9. 124-130 (1995)

Kazuhiko Takahashi：“人细胞外谷胱甘肽过氧化物酶的结构和功能”自由基诊所。9. 124-130 (1995)

DOI：
发表时间：
期刊：
影响因子：
0
作者：
通讯作者：

K.Takahashi: "Extracellular Glutathione Peroxidase" Human Protein Data. 2. (1995)

K.Takahashi：“细胞外谷胱甘肽过氧化物酶”人类蛋白质数据。

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发表时间：
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DOI：
发表时间：
2014
期刊：
影响因子：
0
作者：
中山華穂;三田雄一郎;吉岡佑弥;西藤有希奈;高橋和彦;野口範子;斎藤芳郎;辻田賢一，小川久雄;三田　雄一郎，的場　聖明，星野　温，中岡　幹彦，片村　真紀，足立　壮一，金井　恵理
通讯作者：
三田　雄一郎，的場　聖明，星野　温，中岡　幹彦，片村　真紀，足立　壮一，金井　恵理