21番目のアミノ酸の翻訳に関与する新規RNA結合因子の研究

参与第 21 个氨基酸翻译的新型 RNA 结合因子的研究

• 批准号: 08680644
• 负责人: 高橋 和彦
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08680644/
• 关键词: セレン; RNA結合因子; 翻訳; グルタチオンペルオキシダーゼ; セレノシステイン

セレノシステイン(Sec)はmRNAの読み取り枠内の終止コドンUGAでコードされており,翻訳され得る21番目のアミノ酸である.真核生物では,どのようなメカニズムでSecが取り込まれるかは現在,不明である.Sec含有蛋白のmRNAの3′-非翻訳領域にstem-loop構造をとり得る特異配列(Sec insertion sequence ; SECIS)が認められ,この配列の存在がUGAをSecとして取り込むために必要なことが示されている.今回,我々はこのSECISに結合する細胞質因子の検索を行った.Sec含有蛋白であるヒト細胞質型グルタチオンペルオキシダーゼ(cGPx)のmRNA stem-loop部分89 baseを^<32>Pで標識し,CHO細胞の細胞質画分と反応させた.この反応物にUVを照射してSDS-PAGEを行い、オートラジオグラフィーにより解析したところ,約55KDaの位置に単一のバンドが検出された.しかし,フリーに対する複合体の割合は著しく低かった.そこで他の種々Sec含有蛋白のSECISのついてゲルシフト法で解析を行った.その結果,ヒト血漿セレン含有蛋白Selenoprotein P (SeP)のSECISをプローブとした場合最も強い結合活性が認められた.現在,biotin化したSePのSECISを合成し,これを出発材料と反応後,avidinを不溶化したアガロースと反応し,目的とするRNA結合因子の分離を試みている.この精製に成功したら,その生化学的性質を調べ,遺伝子をクローニングし構造を決定する予定である.

硒代半胱氨酸（SEC）由mRNA阅读框内的终止密码子UGA编码，并且是可以翻译的21个氨基酸。在真核生物中，目前尚不清楚如何使用SEC的机制。发现在含Sec的蛋白的mRNA的3'-非翻译区域中可以将茎环结构的特定序列（SEC插入序列）发现，这表明该序列的存在对于将UGA作为SEC掺入是必要的。我们搜索了与该SECI结合的细胞质因子。人类细胞质谷胱甘肽过氧化物酶（CGPX）的mRNA干循环部分，一种含有SEC的蛋白。将碱标记为 ^<32> p，并与CHO细胞的细胞质分数反应。该反应被紫外线和SDS-PAGE辐照，并通过放射自显影分析，在约55 kDa的位置检测到单个条带。但是，复合物与游离的比率显着降低。因此，使用凝胶移位方法分析各种含SEC的蛋白质的各种含SEC的蛋白质。结果，当使用（SEP）secis作为探针时，含有人血浆硒蛋白硒蛋白P的结合活性最强。目前，合成生物素化的SEP Secis，在与起始材料反应后，琼脂糖不溶于不溶性，与琼脂糖不溶于不溶性的琼脂糖，并试图分离所需的RNA结合因子。一旦这种纯化成功，将研究其生化特性，克隆基因并确定结构。

项目成果

毛利 祐子: "セレノシステイン(Sec)含有蛋白質のmRNA 3′UTRに結合する細胞質因子の検索" 第69回日本生化学会第19回日本分子生物学会合同年会講演要旨集. 462-462 (1996)

森裕子：“寻找与含硒半胱氨酸（Sec）的蛋白质的mRNA 3UTR结合的细胞质因子”第69届日本生化学会年会和第19届日本分子生物学会年会摘要日本。462-462（1996）