動物個体のリアルタイムイメージングを可能とする生物発光小分子プローブの創製

创建生物发光小分子探针，能够对个体动物进行实时成像

基本信息

批准号：
16651106
负责人：
浦野泰照
金额：
$ 2.3万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2006
项目状态：
已结题

项目摘要

昨年度までの研究で確立した、生物発光特性の電子移動による制御(Bioluminescent enzyme-induced electron transfer;以下BioLeTと略す)に基づくプローブ設計に必須となる、発光On/Offの境界電子密度を正確に決定するため、様々な電子密度を有する芳香環を持つパイロット化合物を合成し、その発光特性を精査した。その結果、アミノルシフェリン発光中間体に対する電子移動はアニソール程度の芳香族化合物でも起こりうる一方、発光中間体を電子供与体とするd-BioLeTはニトロベンゼン程度の電子受容能では起こりえないことが明らかとなり、a-BioLeTによるプローブ化に適した骨格であることが明らかとなった。次にアミノルシフェリンと通常のルシフェリンの発光波長が40-50nm程度異なることを利用し、ウェスタンブロットの2次抗体用の酵素として汎用される、HRPとALPの同時定量を試みた。具体的にはHRP/過酸化水素系の発光プローブとして昨年度までに開発に成功したAPLを、ALPのプローブとしては市販のリン酸化ルシフェリンを用い、両者の混在する発光からスペクトル分析で2種の発光を分離することを試みた。具体的には両酵素を任意の割合で混合し、ここに2種のプローブを添加した後、ルシフェリン、ATPを加え、2種の発光スペクトルの分離定量を試みた。その結果、545nmと615nmのフィルターを用いて得られる発光強度を、基準スペクトルパターンに基づいて解析することで両者の分離が可能であり、実際HRP, ALPの活性を同時に検出・定量出来ることが示された。本結果は、ウェスタンブロット膜上における2種以上のタンパクの定量を、同時に信頼性高く行うことを可能にするものであり、分析手法としての生物発光法の幅を広げる画期的なものである。

为了准确地确定发光的发光边界电子密度，这对于基于通过电子传输控制生物发光性能的探针设计至关重要（以下简称生物质，这是在研究中建立的，直到去年，飞行员具有各种电子环的芳香环与各种电子密度且具有液化性的特性。结果，据揭示，尽管电子转移到氨基硫化蛋白发光的中间体可能会发生在芳二烯烯酸酯水平的芳族化合物，D-Biolet的芳族化合物（将发光中间体作为电子供体）中不能出现，但不能在硝基苯水平的电子接收能力中出现，并且它是适合于培训的骨架，它是与二体 - 二体型的框架。接下来，我们尝试同时量化HRP和ALP，这些HRP和ALP通常用作蛋白质印迹的二级抗体的酶，利用了氨基糖蛋白的发射波长和正常荧光素的发射波长差异约40-50 nm。具体而言，我们尝试通过使用APL分析光谱分析将两种类型的光发射与HRP/过氧化氢系统的混合发射探针分开，该光谱分析成功地作为HRP/氢过氧化物基于HRP/氢基于过氧化氢的发光探针，并使用了使用光谱分析的ALP探针，并将其使用的Messcored磷酸化磷酸化荧光素探针作为ALP探针。具体而言，将这两种酶分为任何比例都混合，并添加两种类型的探针，然后添加荧光素和ATP，以尝试对两种类型的发射光谱进行定量分离和定量分离和定量。结果，通过分析基于参考频谱模式使用545 nm和615 nm的过滤器获得的发射强度，可以分离两者，并且可以同时检测和量化HRP和ALP的活性。该结果允许同时确定蛋白质印迹膜上的两种或多种蛋白质，并且是一个开创性的过程，可以扩大生物发光方法作为一种分析技术的范围。

项目成果

期刊论文数量（14）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

Evolution of fluorescein as a platform for finely tunable fluorescence probes

DOI：
10.1021/ja043919h
发表时间：
2005-04-06
期刊：
JOURNAL OF THE AMERICAN CHEMICAL SOCIETY
影响因子：
15
作者：
Urano, Y;Kamiya, M;Nagano, T
通讯作者：
Nagano, T

The detection and quantification of highly reactive oxygen species using the novel HPF fluorescence probe in a rat model of focal cerebral ischemia

DOI：
10.1016/j.neures.2005.08.002
发表时间：
2005-11-01
期刊：
NEUROSCIENCE RESEARCH
影响因子：
2.9
作者：
Tomizawa, S;Imai, H;Saito, N
通讯作者：
Saito, N

酸化ストレスマーカー

氧化应激标记物

DOI：
发表时间：
2005
期刊：
影响因子：
0
作者：
宮澤陽夫;都築毅;仲川清隆;Yosuke Amagai;宮澤陽夫;He W.;宮澤陽夫;Keitaro Ohmori;宮澤陽夫
通讯作者：
宮澤陽夫

Highly efficient and photostable photosensitizer based on BODIPY chromophore

DOI：
10.1021/ja0528533
发表时间：
2005-09-07
期刊：
JOURNAL OF THE AMERICAN CHEMICAL SOCIETY
影响因子：
15
作者：
Yogo, T;Urano, Y;Nagano, T
通讯作者：
Nagano, T

Rational principles for modulating fluorescence properties of fluorescein

DOI：
10.1021/ja048241k
发表时间：
2004-11-03
期刊：
JOURNAL OF THE AMERICAN CHEMICAL SOCIETY
影响因子：
15
作者：
Ueno, T;Urano, Y;Nagano, T
通讯作者：
Nagano, T

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通讯作者：
浦野泰照

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发表时间：
2012
期刊：
影响因子：
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作者：
Uchida L;Heriyanto A;Thongchai C;Hanh TT;Horiuchi M;Ishihara K;Tamura Y;Muramatsu Y;浦野泰照;竹内重吉・南石晃明;今内　覚;Moe Swe Yee and Eiji Nawata
通讯作者：
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通讯作者：
浦野泰照