培養巨核球からの血小板産生に及ぼすNadrinノックダウンの影響

Nadrin 敲低对培养巨核细胞血小板生成的影响

基本信息

批准号：
15659233
负责人：
山本正雅
金额：
$ 1.41万
依托单位：
Tokyo Metropolitan Organization for Medical Research
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2004
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15659233/
关键词：
Nadrin GTP-ase RhoGAP ノックダウン RNAi 巨核球血小板イソフォーム GTPase Rho PDZドメイン

项目摘要

血小板は巨核球の細胞質の一部がちぎれて産生される。産生にはちぎれ方が極性をもって起きることや、細胞骨格の再構築や、顆粒のパッキングなどをコントロールする反応が起きる必要がある。これらの反応にはGTPを介するエネルギーの利用が盛んに行われる。Nadrinは低分子量G蛋白質Rhoファミリーに対するGTPase活性促進蛋白質(Rho-GAP)であり、神経伝達物質の放出や神経突起の伸長に関与する蛋白である。本研究ではヒト血小板にも豊富に存在することを示した。ラットNadrinにはNadrin102、Nadrin104、Nadrin116、Nadrin126の4種類のイソフォームがあり機能が異なると考えられている。各4種類のイソフォームを見分けるウサギ抗体を作製し、ヒト巨核球と血小板の発現を調べた。その結果、ヒト巨核球細胞株MEG-01にはラット同様4種類のNadrinイソフォームが存在することが明らかになった。興味深いことに、ヒト血小板にはNadrin102とNadrin116の発現はなく、主にNadrin104と極少量のNadrin126だけが発現しており、イソフォームが巨核球からの血小板の産生と関係すると思われた。そこで、MEG-01をTPAで処理し血小板を産生させるように分化誘導するとMEG-01のNadrin104には変化なく、Nadrin102,Nadrin116とNadrin126の発現の特異的な減少が認められイソフォームの血小板産生への関与が示唆された。Nadrinイソフォームの共通部分のRNAi用ベクターを作製しCOS細胞に発現したNadrin104の低下を確認した後、ヒト巨核球MEG-01にノックダウンを行った。しかしRNAiによりMEG-01の血小板の産生、形態に変化を認めなかった。血小板産生にはRNAiで残存したNadrinが機能している可能性も否定できなかった。またラット血小板はヒトと異なり4種全てのNadrinの発現が認められイソフォームは直接ラット血小板産生に関係しないと考えられる成績を得た。Nadrinイソフォームの発現が種差により異なることが明らかになり、Nadrinと血小板産生に関し、種差を考慮した検討が必要であると思われる。

血小板是通过撕裂巨核细胞细胞质的一部分而产生的。生产要求撕裂发生在极性中，控制细胞骨架重建的反应以及颗粒的堆积。这些反应涉及通过GTP使用能量。纳德林是一种蛋白质，可促进对低分子量G蛋白（Rho-gap）Rho家族的GTPase活性，并且是一种参与神经递质释放和神经突延伸的蛋白质。这项研究表明，它在人血小板中也很丰富。大鼠纳德林具有四种类型的同工型：NADRIN102，NADRIN104，NADRIN116和NADRIN126，被认为具有不同的功能。准备兔抗体以区分四种同工型中的每一种，并检查了人类巨核细胞和血小板的表达。结果，据揭示了人类巨核细胞系MEG-01具有四种类型的Nadrin同工型，就像在大鼠中一样。有趣的是，人血小板不表达Nadrin102和Nadrin116，主要是Nadrin104和少量NADRIN126，并且似乎同工型与巨核细胞的血小板产生有关。因此，当MEG-01用TPA处理和诱导血小板产生的分化处理时，NADRIN104在MEG-01中没有变化，而NADRIN102，NADRIN116和NADRIN126的表达表达的特定降低表明，同工型涉及血小板产生。制备了RNAi的载体，该载体是NADRIN同工型的常见部分，并确认了在COS细胞中表达的Nadrin104的降低，然后对人巨核细胞MEG-01进行敲低。但是，由于RNAi，MEG-01血小板的生产或形态中没有观察到任何变化。还没有否认保留在RNAi中的纳德林在血小板产生中起作用。此外，与人类不同，在大鼠血小板中观察到了所有四种纳德林的表达，并获得了同工型与大鼠血小板产生无直接相关的结果。已经揭示了纳德林同工型的表达取决于物种的不同，似乎必须考虑纳德林和血小板产生之间的物种差异。