培養巨核球からの血小板産生に及ぼすNadrinノックダウンの影響

Nadrin 敲低对培养巨核细胞血小板生成的影响

基本信息

批准号：
15659233
负责人：
山本正雅
金额：
$ 1.41万
依托单位：
Tokyo Metropolitan Organization for Medical Research
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2004
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15659233/
关键词：
Nadrin GTP-ase RhoGAP ノックダウン RNAi 巨核球血小板イソフォーム GTPase Rho PDZドメイン

项目摘要

血小板は巨核球の細胞質の一部がちぎれて産生される。産生にはちぎれ方が極性をもって起きることや、細胞骨格の再構築や、顆粒のパッキングなどをコントロールする反応が起きる必要がある。これらの反応にはGTPを介するエネルギーの利用が盛んに行われる。Nadrinは低分子量G蛋白質Rhoファミリーに対するGTPase活性促進蛋白質(Rho-GAP)であり、神経伝達物質の放出や神経突起の伸長に関与する蛋白である。本研究ではヒト血小板にも豊富に存在することを示した。ラットNadrinにはNadrin102、Nadrin104、Nadrin116、Nadrin126の4種類のイソフォームがあり機能が異なると考えられている。各4種類のイソフォームを見分けるウサギ抗体を作製し、ヒト巨核球と血小板の発現を調べた。その結果、ヒト巨核球細胞株MEG-01にはラット同様4種類のNadrinイソフォームが存在することが明らかになった。興味深いことに、ヒト血小板にはNadrin102とNadrin116の発現はなく、主にNadrin104と極少量のNadrin126だけが発現しており、イソフォームが巨核球からの血小板の産生と関係すると思われた。そこで、MEG-01をTPAで処理し血小板を産生させるように分化誘導するとMEG-01のNadrin104には変化なく、Nadrin102,Nadrin116とNadrin126の発現の特異的な減少が認められイソフォームの血小板産生への関与が示唆された。Nadrinイソフォームの共通部分のRNAi用ベクターを作製しCOS細胞に発現したNadrin104の低下を確認した後、ヒト巨核球MEG-01にノックダウンを行った。しかしRNAiによりMEG-01の血小板の産生、形態に変化を認めなかった。血小板産生にはRNAiで残存したNadrinが機能している可能性も否定できなかった。またラット血小板はヒトと異なり4種全てのNadrinの発現が認められイソフォームは直接ラット血小板産生に関係しないと考えられる成績を得た。Nadrinイソフォームの発現が種差により異なることが明らかになり、Nadrinと血小板産生に関し、種差を考慮した検討が必要であると思われる。

血小板是通过撕下巨核细胞的部分细胞质产生的。对于生产来说，有必要发生具有极性的撕裂，并且发生控制细胞骨架重建、颗粒堆积等的反应。这些反应通过 GTP 积极利用能量。 Nadrin 是低分子量 G 蛋白 Rho 家族的一种 GTP 酶活性促进蛋白 (Rho-GAP)，是一种参与神经递质释放和神经突生长的蛋白质。在这项研究中，我们表明它也大量存在于人类血小板中。大鼠 Nadrin 有四种亚型：Nadrin102、Nadrin104、Nadrin116 和 Nadrin126，它们被认为具有不同的功能。我们创建了区分四种亚型的兔抗体，并研究了它们在人类巨核细胞和血小板中的表达。结果表明，与大鼠一样，人巨核细胞系MEG-01含有四种类型的Nadrin亚型。有趣的是，人类血小板不表达Nadrin102和Nadrin116，仅表达Nadrin104和极少量的Nadrin126，这表明该亚型与巨核细胞产生血小板有关。因此，当MEG-01用TPA诱导分化产生血小板时，MEG-01的Nadrin104没有变化，但观察到Nadrin102、Nadrin116和Nadrin126的表达特异性降低，导致产生建议涉及同种型血小板。在为 Nadrin 亚型的共同部分创建 RNAi 载体并确认 COS 细胞中 Nadrin104 表达减少后，在人巨核细胞 MEG-01 中进行了敲低。然而，由于 RNAi，MEG-01 中的血小板生成或形态没有观察到变化。不能排除RNAi后Nadrin在血小板生成中发挥作用的可能性。此外，与人类不同的是，大鼠血小板表达所有四种类型的Nadrin，这表明亚型与大鼠血小板的产生没有直接关系。已经清楚的是，Nadrin 亚型的表达因物种而异，并且在有关 Nadrin 和血小板生成的研究中似乎有必要考虑物种差异。