Wntシグナル経路における受容体のエンドサイトーシスを解析する実験系の確立

Wnt信号通路受体内吞分析实验体系的建立

基本信息

批准号：
15659077
负责人：
菊池章
金额：
$ 2.11万
依托单位：
Hiroshima University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15659077/
关键词：
受容体エンドサイトーシス Wnt β-カテニン Frizzled ダイナミンリサイクリング

项目摘要

Wntシグナル経路の解析において最も研究が遅れているのは、Wntとその受容体のエンドサイトーシスの制御機構に関するものである。本研究では、他の受容体で行なわれているようなエンドサイトーシスの実験系の確立することを目的として、本年度は下記の成果を得た。(1)ダイナミンK44Aはアドレナリン受容体刺激によるエンドサイトーシスを抑制することが知られているが、ダイナミンK44AはWnt-3a依存性のβ-カテニンの蓄積を抑制した。また、EpsinのENTH領域がインスリンとEGFの受容体のエンドサイトーシスを阻害するが、ENTH領域もWnt-3a依存性のβ-カテニンの蓄積を抑制した。さらに、クラスリンを安定化させ、受容体のエンドサイトーシスを阻害するダンシルカダベリンを細胞に作用させると、Wnt-3a依存性のβ-カテニンの蓄積が減少した。したがって、Wnt-3aによるβ-カテニン経路の活性化には、受容体のエンドサイトーシスが必要であることが示唆された。(2)Flag tagを付加したFrizzled 8(Wnt-3aの受容体の一つ)を発現した293細胞に、Wnt-3a conditioned mediumを作用させ、Frizzled 8がエンドサイトーシスされる様子を観察した。Wnt-3aを作用させる前には、細胞膜上に存在していたFrizzled 8は30〜60分後に細胞内の小胞上に局在して、120分後には、再び細胞膜上に見出された。したがって、Frizzled 8はWnt-3aと結合した後に、細胞内に取り込まれ、その後に再利用されると考えられた。この実験系は、Wntとその受容体のエンドサイトーシスの解析する上で有用である。以上の結果から、本研究課題は計画通りに遂行されたと判断している。

Wnt信号通路分析中最晚的研究是关于控制Wnt及其受体内吞作用的机制。这项研究旨在建立在其他受体上进行的内吞作用实验系统，今年我们获得了以下结果：（1）已知Dynamin K44a抑制由肾上腺素能受体刺激引起的内吞作用，而Dynamin K44A A抑制WNT-3A抑制的WNT-3A依赖于β-钙蛋白的研究。此外，EPSIN的ENTH区域抑制了胰岛素和EGF受体的内吞作用，而ENTH区也抑制了Wnt-3A依赖性β-catenin的积累。此外，稳定网格蛋白并抑制受体内吞作用的Dansylcadaverine降低了Wnt-3A依赖性β-catenin的积累。因此，有人提出受体内吞作用是通过WNT-3A激活β-catenin途径所必需的。（2）我们观察到，Wnt-3A条件培养基在293个细胞上作用于表达毛躁的8（Wnt-3a的受体之一），并带有标志标签，并且毛躁8被内囊。在激活Wnt-3a之前，在细胞膜上存在的毛躁8在30-60分钟后位于细胞内囊泡上，并在120分钟后再次在细胞膜上发现。因此，人们认为在与Wnt-3a结合后，在细胞中摄入了毛躁8，然后再回收。该实验系统可用于分析Wnt及其受体的内吞作用。基于上述结果，确定该研究主题是根据计划进行的。