放射性機能分子を用いる遺伝子発現のインビボイメージング法の開発

开发利用放射性功能分子进行基因表达的体内成像方法

基本信息

批准号：
15659008
负责人：
佐治英郎
金额：
$ 2.11万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2004
项目状态：
已结题

项目摘要

将来の治療法として注目されている遺伝子治療において、放射線の特徴を活かして、導入した治療遺伝子の発現量・発現部位・発現期間を生きた状態でインビボイメージングする方法を開発するために、体内に導入するベクターに治療遺伝子以外に、その遺伝子の発現を核医学的手法を用いてモニターするためのレポーター遺伝子を導入し、レポーター遺伝子の発現をインビボイメージングにより治療遺伝子の発現を非侵襲的にモニターすることを計画した。そこで、本研究では、治療遺伝子として、移植医療における免疫抑制遺伝子治療への展開を考慮して免疫抑制サイトカインviral IL-10 (vIL-10)を選択するとともに、レポーター遺伝子として、遺伝子治療の対象となる末梢臓器にはほとんど存在せず、かつ産生するレポータータンパク質が生体内で反応しないために変異型dopamine D2 receptor (mD2R)の遺伝子を考案し、両者を同時に発言させるためにinternal ribosome entry site (IRES)を挟んで組み込んだ発現ベクターpCMV-vIL10-IRES-mD2Rを構築した。そして、このベクターを細胞に導入したところ、細胞内に両遺伝子が発現していることを認めた。さらに、このベクターをカチオン性リボソームに導入、それを動物に投与し、その後レポータータンパク質mD2Rに結合する放射性リガンドI-123-IBGMを投与して、主要臓器における放射能の集積状態およびvIL10の発現量を調べた結果、両者が高く相関していることを認め、本法により遺伝子発現のイメージングが可能であることを見出した。

在基因处理中，它吸引了将来作为一种未来的治疗，以开发一种利用辐射的特征来利用引入的治疗基因的表达，表达位点和表达周期。，引入了使用核医学方法来监测基因表达的报告基因，并且对报道基因的表达进行了侵入性监测治疗基因的表达。因此，在这项研究中，作为治疗基因，选择了用于移植医学中免疫抑制基因治疗的免疫抑制性细胞因子病毒IL-10（VIL-10），并且它作为报告基因的基因治疗。なる末梢臓器にはほとんど存在せず、かつ产生するレポータータンパク质が生体内で反応しないために変异型多巴胺D2受体（MD2R）の遗伝子を考案し、両者を同时に発言させるために内部核糖体进入位点（IRES）（）构建了Express Vector PCMV-VIL10-IRES-MD2R。当将该载体引入细胞时，他承认在细胞中表达了两个宝石。此外，该载体被引入阳离子核糖体中，将其用于动物，然后将放射性配体I-123-IBGM与报告基因MD2R结合，并在主要器官中表达的放射性状态和VIL10的表达，他承认它们高度相关，并发现该定律可以对遗传表达进行想象。