僧帽細胞軸索をガイドする分子の網羅的スクリーニング

全面筛选引导二尖瓣细胞轴突的分子

• 批准号: 11780530
• 负责人: 平田 たつみ
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: National Institute of Genetics
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 2000
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-11780530/
• 关键词: 軸索ガイド; lot細胞; 神経発生; 嗅索; cDNAサブトラクション; 軸索ガイダンス

マウス胚嗅球の僧帽細胞の軸索は、終脳の非常に狭い領域を選択的に伸長し、嗅索と呼ばれる軸索束を形成する。この軸索は、嗅索領域に局在する道標的神経細胞lot細胞によってガイドされる事が知られている。lot細胞による軸索ガイドの分子機構を探る目的で、この細胞に特異的に発現する遺伝子のスクリーニングを行った。lot細胞を多量に含む嗅索領域とlot細胞を含まない新皮質領域から、それぞれmRNAを調製してcDNAを合成した。嗅索領域に存在する遺伝子だけを特異的に増幅できるように工夫してPCR反応を行い、得られたcDNA断片をベクターに挿入して、サブトラクティブライブラリーを作成した。そのうちの約500クローンについてdifferential hybridizationをおこない、嗅索領域により強く発現する130個のクローンを選択した。これらについて塩基配列の決定、ならびにin situ hybridizationを行って発現領域を検討したが、lot細胞に特異的に発現するものは得られなかった。今後はさらに多くのcDNAクローンのスクリーニングを継続して行う予定である。

小鼠胚胎嗅球中二尖瓣细胞的轴突选择性地延伸到端脑的非常狭窄的区域，形成称为嗅束的轴突束。已知该轴突由位于嗅觉区域的目标神经元细胞引导。为了探索批次细胞引导轴突的分子机制，我们筛选了这些细胞中特异表达的基因。从含有大量批次细胞的嗅道区域和不含有批次细胞的新皮质区域制备mRNA并合成cDNA。 PCR反应以只能特异性扩增嗅觉区域中存在的基因的方式进行，并将所得的cDNA片段插入载体中以创建消减文库。我们对大约 500 个克隆进行了差异杂交，并选择了 130 个在嗅觉区域表达更强的克隆。尽管我们确定了这些基因的碱基序列并进行了原位杂交以检查它们的表达区域，但我们无法找到在批次细胞中特异性表达的任何基因。我们计划将来继续筛选更多的 cDNA 克隆。

项目成果

T.Hirata et al.: "Short-range guidance of olfactory bulb axons is independent of repulsive factor slit."J.Neurosci. (in press). (2001)

T.Hirata 等人：“嗅球轴突的短程引导与排斥因子狭缝无关。”J.Neurosci。

T. Hirata and H. Fujisawa: "Environmental control of collateral branching and target invasion of mitral cell axons during development"J. Neurobiol. 38. 93-104 (1999)

T. Hirata 和 H. Fujisawa：“发育过程中二尖瓣细胞轴突的侧支分支和目标侵袭的环境控制”J。

平田たつみ: "終脳における神経細胞の移動と領域特異化"細胞工学. (印刷中). (2001)

Tatsumi Hirata：“端脑神经元的迁移和区域规范”细胞工程（印刷中）。

Tomioka et al.: "Neocortical origin and tangential migration of guidepost neurons in the lateral olfactory tract"J.Neurosci.. 20. 5802-5812 (2000)

Tomioka 等人：“侧嗅束中路标神经元的新皮质起源和切向迁移”J.Neurosci.. 20. 5802-5812 (2000)

平田たつみ,佐藤泰史: "マウス終脳培養系を用いた軸索ガイダンス機構の解析"細胞工学. 18. 77-83 (1999)

Tatsumi Hirata、Yasushi Sato：“利用小鼠端脑培养系统分析轴突引导机制”《细胞工程》18. 77-83 (1999)。