虚血性神経細胞障害における小胞輸送蛋白Mintsの役割に関する実験的研究

囊泡转运蛋白Mints在缺血性神经元损伤中作用的实验研究

基本信息

批准号：
11770341
负责人：
西村裕之
金额：
$ 1.41万
依托单位：
Hyogo Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至 2000
项目状态：
已结题

项目摘要

目的:in vivoにおいてmunc18-Interacting Proteins(mints)およびmunc18の脳虚血負荷後の脳内動態および発現細胞を検討し、虚血性神経細胞障害における前シナプス小胞輸送異常を評価した。方法:雄性C57/B6マウスを用い、軽ハロセン麻酔下にクリップにて両側総頚動脈結紮し、一過性前脳虚血を作成した。免疫組織化学、Western blottingを用いてmint1とmunc18およびsynaptophysinの産生動態を検討した。結果:(1)正常マウスの海馬ではmint1はdentate gyrusのmolecular layerのうちentorhinal projectionの領域と顆粒細胞からのmossy fiberに強く免疫陽性を認めた。(2)電顕的にはmint1は前シナプス終末のactive zoneとシナプス小胞に局在しmunc18は主にactive zoneに、synaptophysinは主にシナプス小胞に局在していた。(3)mint1のmossy fiberの終末での標識は虚血後1日目に一過性に低下し、3日目には逆に亢進していた。その後7日目にはコントロールレベルに復した。(4)munc18の免疫染色は全経過を通じて変化はなかった。(5)Western blotの検討では虚血負荷後3日目に一過性の海馬mint1蛋白の発現亢進が認められ,虚血負荷後7日目にはmint1蛋白量は低下していた。考察:mint1は海馬遅発性神経細胞死の過程で苔状線維の前シナプス終末内で局在が変動することが明らかとなった。したがって、mint1はシナプス小胞輸送を制御することで虚血負荷後の興奮性アミノ酸神経伝達に関与している可能性が示唆された。

目的：我们研究了Munc18相互作用蛋白（MINTS）和MUNC18体内脑缺血性负荷后的脑动力学和表达的细胞，并评估了缺血性神经元损伤中突触前囊泡转运的异常。方法：将雄性C57/B6小鼠用片段在光静光麻醉下用夹子绑扎，以产生瞬时前脑缺血。使用免疫组织化学和蛋白质印迹研究了MINT1，MUNC18和突触素的生产动力学。结果：（1）MINT1在正常小鼠海马的颗粒细胞中的内hin骨投射区域和苔藓纤维的区域强烈免疫阳性。（2）电子显微镜表明，MINT1位于活性区域和突触前末端的突触囊泡，MUNC18主要定位于活性区，突触possintyphysin主要定位于突触囊泡。（3）在缺血后的第一天，MINT1苔藓纤维的末期标记瞬时降低，第三天增加。然后在第七天，患者返回控制水平。（4）在整个课程中，MUNC18的免疫染色没有改变。（5）在蛋白质印迹研究中，在缺血性载荷后的第三天观察到海马Mint1蛋白的短暂增加，并且在缺血性载荷后的第7天，MINT1蛋白的量减少了。讨论：已经揭示了MINT1在后期海马神经元死亡过程中会改变苔藓纤维突触前末端的定位。因此，建议通过控制突触囊泡转运后缺血性载荷后，MINT1可能参与兴奋性氨基酸神经传递。