蛋白質膜透過に関与する膜内在性因子SecGの構造と機能

参与蛋白质膜渗透的整合膜因子 SecG 的结构和功能

基本信息

批准号：
09780540
负责人：
西山賢一
金额：
$ 1.54万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至 1998
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09780540/
关键词：
蛋白質膜透過 SecG SecA 大腸菌分泌膜内配向性プロトン駆動力リン脂質 GpsA

项目摘要

大腸菌における蛋白質膜透過反応において、ATPase活性を持つSecAはATPの結合により膜挿入し、加水分解を伴って膜から脱離するというサイクルを繰り返すと考えられている。申請者らは、膜内在性因子SecGが膜内配向性の反転・回復サイクルを繰り返すといった、膜蛋白質に対する常識を覆すほど大きな構造変化を引き起こしていることを発見している。膜透過反応におけるSecGの機能と膜内配向性の反転との関連を明らかにするため、種々のsec変異株のsecG遺伝子破壊を行った。secG遺伝子破壊により菌は低温感受性となるが、secAcsR11株のsecG遺伝子を破壊するとあらゆる温度で生育不能となった。このことはSecAとSecGの間に機能的相互作用があることを強く示唆している。このsecAcsR11株の変異部位を決定し、変異SecA(csSecA)を精製して生化学的な解析を行った。その結果、csSecAは前駆体蛋白質との相互作用が弱くなっており、csSecAによる蛋白質膜透過にはSecGが必須であることが判明した。また、csSecAの膜挿入もSecG依存であった。これらのことからSecA-SecG間には機能的に密接な関係があることが示された。蛋白質膜透過反応はプロトン駆動力により促進される。次にプロトン駆動力がSecA-SecGサイクルに及ぼす影響を調べた。その結果、SecAのATPase活性を阻害して膜挿入SecAの脱離を阻害してもプロトン駆動力を形成させるとSecAは脱離することを発見した。すなわち;プロトン駆動力により膜挿入SecAがATPの加水分解を必要とせずに脱離し、その結果膜透過が促進されると考えられる。また、低温下でSecGが存在しないとき、プロトン駆動力により膜挿入SecA量が増加することも判明した。このことは、プロトン駆動力がSecAの脱離のみに関与するのではなく、膜挿入も促進していることを強く示唆している。

在大肠杆菌中的蛋白质膜透明反应中，具有ATPase活性的SECA被认为可以重复通过ATP结合插入膜的循环，并从膜上重复水解。申请人发现，室内的因子SECG引起了巨大的结构变化，以推翻膜蛋白的常识，例如重复内部室内的逆转和恢复周期。为了阐明SECG在膜传输反应中的功能与膜内部逆转之间的关系，SEC突变量被破坏了。由于SECG基因破坏，细菌具有低温度的灵敏度，但是当Secacsr11菌株的SECG基因被破坏时，在每个温度下都无法生长。这强烈表明SECA和SECG之间存在功能相互作用。确定了该SECACSR11菌株的突变位点，并将变体SECA（CSSECA）精制成生物分析。结果，CSSECA与前体蛋白的相互作用较弱，并且发现SECG对于CSSECA的蛋白质膜传播至关重要。此外，CSSECA的插入也取决于SECG。这些事实表明，seca-secg之间存在功能密切的关系。蛋白质膜反应是通过质子驱动力促进的。然后，他检查了质子驾驶力对SECA-SECG周期的影响。结果，发现即使抑制了SECA的ATPase活性并形成了膜插入SECA的细分，SECA也会分离是否形成质子驱动力。也就是说，据认为，质子驱动力会在不需要水解ATP的情况下将膜分开插入SECA，结果，透明度得到了提升。还发现，当SECG在低温下不存在时，由于质子驾驶力而导致的膜插入量增加。这强烈表明，质子驱动力不仅参与了SECA的撤离，还促进了膜插入。