ボルナ病ウイルスの人畜共通感染性に関する疫学的ウイルス学的研究

博尔纳病病毒人畜共患病的流行病学和病毒学研究

基本信息

批准号：
09760296
负责人：
堀本泰介
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Osaka Prefecture University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至 1998
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09760296/
关键词：
ボルナ病抗体検査疫学ボルナ病ウイルス疫学調査

项目摘要

元来中央ヨーロッパのウマに進行性脳脊髄炎をひきおこすことで知られていたボルナ病ウイルス(BDV)は、最近になって、人にも感染し、何らかの精神性疾患の原因になる可能性が報告された。このBDVの人畜共通感染性を証明するためには疫学的方法が必須であるが、BDV感染診断法はまだ標準化されていない。本研究では、BDVのヌクレオプロテインp40を抗原とする特異抗体検出法について検討した。融合蛋白(GST/p40)を発現する大腸菌ライセートを抗原としたウエスタンイムノプロット(WIB)法を用いて、国内の健常ウマ野外血清(1:100)を反応させてみると、いくつかでGST/p40との反応がみられ(GST対照とは反応が見られない)、BDV抗体の存在が示唆された。しかし同時に大腸菌由来蛋白との反応も見られたので、反応特異性を確認するためにGST/p40を用いて吸収試験を行ったところ、吸収される検体と吸収されない検体が認められた。前者は抗体とp40との特異的な結合を示唆するが、後者はp40の一次構造依存的な非特異抗体吸着性の存在を示唆している。それでp40に存在する抗原部位および非特異的抗体吸着部位を解析するために、制限酵素切断部位を利用した部分欠損融合蛋白をN末側3種類、C末側4種類大腸菌で発現させ、抗p40モノクローナル抗体、BDV感染参照血清、ウマ野外血清との反応性を調べてみた。その結果、p40には全領域を通じて抗原部位が認められるが、特にN末端側のエピトープに対する抗体が、感染動物血清中に優位に誘導されることが示唆された。一方、p40のC末端側に血清と非特異的な反応を引き起こす領域の存在が推定された。従って、この領域を取り除いたp40抗原がBDV特異抗体の検出に応用できると考えられた。

最近据报道，最初因在中欧引起进行性脑脊髓炎而闻名的伯纳病病毒（BDV）最近据报道会感染人类，并可能引起某种精神疾病。流行病学方法对于证明该BDV的人畜共患性质至关重要，但是BDV感染诊断方法尚未标准化。在这项研究中，我们研究了一种使用BDV的核蛋白p40作为抗原检测特定抗体的方法。使用西部免疫局（WIB）方法，使用大肠杆菌裂解物表达融合蛋白（GST/p40）作为抗原，与家庭健康马场血清（1：100）一起观察到该反应（1：100），某些病例显示与GST/P40的反应（无GST对照组的反应），表明存在BDV抗体的存在。然而，当还观察到与大肠杆菌衍生蛋白的反应，使用GST/p40进行了吸收测试，以确认反应的特异性，并吸收了被吸收的样品且未被吸收的样品。前者提出了抗体与p40的特异性结合，而后者则表明存在非特异性抗体吸附特性，而这些抗体吸附特性是主要结构依赖性的。 To analyze the antigenic sites and non-specific antibody adsorption sites present in p40, we expressed partially deficient fusion proteins using restriction enzyme cleavage sites in three types of N-terminal and four types of C-terminal E. coli, and examined the reactivity with anti-p40 monoclonal antibodies, BDV-infected reference serum, and horse field serum.结果，在整个p40的整个区域中都发现了抗原位点，这表明在受感染的动物的血清中主要诱导了N末端表位的抗体。另一方面，假定在p40的C末端推测引起非特异性反应的区域的存在。因此，人们认为已去除的p40抗原可以应用于检测BDV特异性抗体。