ウイルス増殖を制御する細胞性因子の新しいランダム同定法の確立

控制病毒增殖的细胞因子随机鉴定新方法的建立

基本信息

批准号：
16658137
负责人：
堀本泰介
金额：
$ 2.3万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2005
项目状态：
已结题

项目摘要

ウイルスの増殖は様々な細胞性因子により制御される。本研究では、インフルエンザウイルスをモデルに、これらの細胞性因子を網羅的に同定する新しい方法の確立を目的とする。それは、インフルエンザウイルスに感受性の細胞由来のcDNAライブラリーを組み込んだウイルスライブラリーを利用する方法である。つまり、組み換えウイルスが感染した細胞では、そのcDNA由来の蛋白質が発現し、それがウイルス増殖に必須であれば、組み換えウイルスは抵抗性細胞においても増殖する。したがって、組み換えウイルスライブラリーを様々な感染抵抗性細胞において解析すれば、ウイルス増殖を制御する細胞困子をランダムに同定できる。この作業仮説のもと、私たちは、GFPをレポーターとした組み換えウイルスシステムを検討した。その結果、HA/NAタンデムシステムと9本鎖ベクターシステムを確立した。前者は、本来のHA分節のHA遺伝子の下流にプロモーター配列を介してNA遺伝子をタンデムに挿入することにより、bicistoronicなHA分節を構築し、本来のNA分節のNA遺伝子の変わりに外来遺伝子を搭載するシステムである。後者は、HA分節のHA遺伝子の代わりにNA遺伝子を挿入したキメラ分節を構築し、本来のNA分節のNA遺伝子の変わりに外来遺伝子を搭載するシステムであり、つまりHA分節を2本もつような9本鎖ウイルスをレスキューするシステムである。いずれのシステムでもGFPレポーター遺伝子は比較的安定に維持されることがわかった。しかし、GFP遺伝子の代わりにcDNAを挿入した場合には、その分節が組換えウイルス中に安定して維持されないことが判明した。この欠点を補うために、他のベクターシステムの検討を行い、HA/NSタンデムシステムの構築に成功した。今後は、このシステムを本研究に応用する予定である。

病毒增殖受多种细胞因子控制。这项研究旨在建立一种新方法，以使用流感病毒作为模型来全面识别这些细胞因素。它是一种使用病毒文库的方法，该病毒文库结合了对流感病毒敏感的细胞的cDNA文库。换句话说，在感染重组病毒的细胞中，衍生自cDNA的蛋白质被表达，如果对于病毒增殖至关重要，重组病毒也会在抗性细胞中增殖。因此，通过分析各种抗感染细胞中的重组病毒文库，可以随机鉴定控制病毒增殖的细胞凹陷。基于这个工作假设，我们使用GFP作为记者研究了重组病毒系统。结果，建立了HA/NA串联系统和九个链的矢量系统。前者是一个系统，其中将Bistoronic HA段插入了原始HA段的HA基因下游通过启动子序列插入串联，并将外国基因固定在代替原始Na段的Na基因。后者是构造嵌合段的系统，其中插入了Na基因代替HA段的HA基因，并代替原始Na段的Na基因，它是一个拯救九个链的病毒的系统，具有两个HA段。发现在两个系统中，GFP报告基因相对稳定。但是，当插入cDNA代替GFP基因时，发现该片段在重组病毒中不稳定。为了弥补这一缺点，我们研究了其他向量系统，并成功构建了HA/NS串联系统。将来，该系统将应用于这项研究。