T細胞分化決定にともなうTCRβ遺伝子の転写と再構成の機構解明

TCRβ基因转录和重排与T细胞分化决定相关的机制

基本信息

批准号：
08770241
负责人：
穂積勝人
金额：
$ 0.64万
依托单位：
Tokai University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08770241/
关键词：
T細胞分化遺伝子再構成 TCR 脱メチル化 GATA3

项目摘要

我々はT細胞系列分化決定の分子機構を解明することを目的として、TCR遺伝子再構成に先行して起こる、TCR遺伝子の脱メチル化およびgerm-line型転写がT細胞初期分化の有用なマーカーになることを見出し、これを誘導する分子機構について解析してきた。本研究ではT細胞特異性の高い転写因子、GATA3に着目し、GATA3が発現しないB系細胞(A20)にGATA3cDNAを正逆両方向に導入し、その影響について検討した。その結果、正方向にGATA3を導入したトランスフェクタント(Tf)においてのみ、TCRβ遺伝子のJβ2領域での脱メチル化が誘導された。しかし、Jβ1領域での脱メチル化は認められなかったことから、導入したGATA3はβ遺伝子エンハンサーのみならず、これまでに知られていないJβ2特異的な領域にも影響される可能性が示された。そこでJβ2上流域の塩基配列を検索するとともに、一部配列が明らかにされていないJβ1上流域の塩基配列を決定したところ、Jβ2上流域にのみGATA3結合配列が見出され、そのGATA3との結合がEMSAにて確認された。しかし、GATA3結合配列を含むJβ2上流域をクローン化後、luciferase遺伝子上流に接合し、転写活性化能を、germ-line型転写が認められた未熟T細胞株(当教室にて樹立)に導入して調べたが、有意な活性は認められなかった。GATA3-TfにおいてもTCRβ遺伝子のgerm-line型転写は検出されなかったことと考え合わせると、転写反応の開始には、GATA3以外の転写因子がさらに必要なことが予想された。しかしGATA3発現によってJβ2上流域は脱メチル化反応に示されるDNAの状態変化が誘導されたものと考えられ、T細胞初期分化におけるGATA3の重要性とともに、Jβ2特異的なシスエレメントの存在が強く示唆された。

为了阐明T细胞谱系分化决定的分子机制，我们发现TCR基因去甲基化和种系转录发生在TCR基因重排之前，是早期T细胞分化的有用标记。并分析了引起这一现象的分子机制。在本研究中，我们重点关注 GATA3（一种对 T 细胞高度特异性的转录因子），并检查了将 GATA3 cDNA 正向和反向转染到不表达 GATA3 的 B 谱系细胞 (A20) 中的效果。结果，仅在正向导入GATA3的转染子(Tf)中诱导TCRβ基因的Jβ2区域的去甲基化。然而，在 Jβ1 区域没有观察到去甲基化，这表明引入的 GATA3 可能不仅受到 β 基因增强子的影响，而且还受到以前未知的 Jβ2 特异性区域 Ta 的影响。因此，我们搜索了Jβ2上游区域的核苷酸序列，并确定了其序列尚未明确的Jβ1上游区域的核苷酸序列，并发现仅在Jβ2上游区域中存在GATA3结合序列。经 EMSA 确认。然而，克隆含有GATA3结合序列的Jβ2上游区域后，将其融合到荧光素酶基因的上游，并将转录激活能力引入未成熟T细胞系（本部门建立）中，其中种系型转录然而，没有观察到显着的活性。考虑到在GATA3-Tf中未检测到TCRβ基因的种系型转录，因此预测转录反应的起始还需要GATA3以外的转录因子。然而，人们认为 GATA3 表达会诱导 Jβ2 上游区域 DNA 状态的变化，这是由去甲基化反应所表明的，强烈表明 GATA3 在早期 T 细胞分化中的重要性以及 Jβ2 特异性的存在顺元素完成了。