T細胞分化決定にともなうTCRβ遺伝子の転写と再構成の機構解明

TCRβ基因转录和重排与T细胞分化决定相关的机制

基本信息

批准号：
08770241
负责人：
穂積勝人
金额：
$ 0.64万
依托单位：
Tokai University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08770241/
关键词：
T細胞分化遺伝子再構成 TCR 脱メチル化 GATA3

项目摘要

我々はT細胞系列分化決定の分子機構を解明することを目的として、TCR遺伝子再構成に先行して起こる、TCR遺伝子の脱メチル化およびgerm-line型転写がT細胞初期分化の有用なマーカーになることを見出し、これを誘導する分子機構について解析してきた。本研究ではT細胞特異性の高い転写因子、GATA3に着目し、GATA3が発現しないB系細胞(A20)にGATA3cDNAを正逆両方向に導入し、その影響について検討した。その結果、正方向にGATA3を導入したトランスフェクタント(Tf)においてのみ、TCRβ遺伝子のJβ2領域での脱メチル化が誘導された。しかし、Jβ1領域での脱メチル化は認められなかったことから、導入したGATA3はβ遺伝子エンハンサーのみならず、これまでに知られていないJβ2特異的な領域にも影響される可能性が示された。そこでJβ2上流域の塩基配列を検索するとともに、一部配列が明らかにされていないJβ1上流域の塩基配列を決定したところ、Jβ2上流域にのみGATA3結合配列が見出され、そのGATA3との結合がEMSAにて確認された。しかし、GATA3結合配列を含むJβ2上流域をクローン化後、luciferase遺伝子上流に接合し、転写活性化能を、germ-line型転写が認められた未熟T細胞株(当教室にて樹立)に導入して調べたが、有意な活性は認められなかった。GATA3-TfにおいてもTCRβ遺伝子のgerm-line型転写は検出されなかったことと考え合わせると、転写反応の開始には、GATA3以外の転写因子がさらに必要なことが予想された。しかしGATA3発現によってJβ2上流域は脱メチル化反応に示されるDNAの状態変化が誘導されたものと考えられ、T細胞初期分化におけるGATA3の重要性とともに、Jβ2特異的なシスエレメントの存在が強く示唆された。

为了阐明T细胞谱系分化测定的分子机制，我们发现在TCR基因重排之前发生的TCR基因的脱甲基化和生殖线转录是早期T细胞分化的有用标记，并且已经分析了诱导这一点的分子机制。在这项研究中，我们专注于GATA3，这是一种具有高T细胞特异性的转录因子，并将GATA3 cDNA置于正向和反向方向上，并将其反向细胞（A20）（A20）（A20）引入不表达GATA3，并检查了其效果。结果，仅在与GATA3一起引入正方向的转染剂（TF）中诱导TCRβ基因的Jβ2区域的脱甲基化。然而，未观察到Jβ1区域中的脱甲基化，表明引入的GATA3不仅可能受Beta基因增强子的影响，而且还受到以前未知的Jβ2特异性区域的影响。因此，搜索了上游Jβ2的基本序列，并确定未揭示某些序列的上游Jβ1的基本序列。 GATA3结合序列仅在上游Jβ2中发现，并且EMSA证实与GATA3的结合。然而，在克隆包含GATA3结合序列的Jβ2的上游区域后，将其连接到荧光素酶基因的上游，并将其转录激活能力引入未成熟的T细胞系（在我们的教室中建立）（在我们的教室中建立），在该教室中，没有经过重大的活性，但发现了显着的活性。考虑到GATA3-TF中未检测到TCRβ基因的种系类型转录，因此可以预测，启动转录反应需要更多的GATA3以外的转录因子。然而，人们认为GATA3表达诱导了Jβ2上游区域中脱甲基反应中显示的DNA状态的变化，并且强烈建议存在Jβ2特异性CIS元件的存在，以及GATA3在早期T细胞分化中的重要性。