T細胞分化過程におけるTCR遺伝子高次構造制御の分子機構

T细胞分化过程中TCR基因构象控制的分子机制

基本信息

批准号：
09770224
负责人：
穂積勝人
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Tokai University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至 1998
项目状态：
已结题

项目摘要

T細胞受容体(TCR)の4鎖は、各分化ステージ特異的に遺伝子が再構成して発現する。しかし、そのような遺伝子DNAの高次構造を制御する機構は不明な点が多い、この課題解明の一端として、本研究では1)TCR-α鎖遺伝子変化を制御するシスエレメントの同定、及び2)TCR-β鎖遺伝子再構成とT細胞系列分化に深く関わる転写因子GATA3の役割を検索した。その結果得た各項目の成果を以下に記載する。1)昨年、TCR-α鎖遺伝子の分化ステージ特異的な新しい制御シスエレメントをJα49上流域(170bp)に見出した。本年度は、その領域を129マウスゲノムライブラリーから単離して、それをもとにtargeting-vectorを作製し、homologousrecombination法により当該領域欠損マウスを樹立した。その解析の結果、TCR-α鎖の内、Jα49-45セグメントまでの遺伝子再構成とgerm line(GL)転写は検出されなかった。従って、TCR-α鎖遺伝子再構成にはエンハンサー以外に分化ステージ特異的なシスエレメントが近傍のセグメントに作用することが明らかとなった。さらに、先行するGL転写は同部位のDNA再構成に必須であることを、直接証明した。2)TおよびB両細胞すべての分化ステージに発現を惹起するベクターを結合した遺伝子を導入したGATA3ミュータントマウスを作製した。それらから繁殖したマウスの胎仔肝、骨髄、脾臓からプレB細胞とB細胞を得て解析したが、予想に反してB細胞系のどの分化ステージにもTCR-β鎖遺伝子の再構成は認められなかった。又、B細胞の減少も著明でなかった。B細胞分化への抑制が著しくない1原因として、導入GATA3遺伝子の弱発現が考えられるので、現在異なるプロモーター結合のGATA3導入マウスを作製中である。

T 细胞受体 (TCR) 的四条链通过特定于每个分化阶段的重排基因表达。然而，控制遗传DNA高阶结构的机制的许多方面仍不清楚。作为阐明这个问题的一部分，本研究旨在1）识别控制TCR-α链基因变化的顺式元件）；转录因子GATA3的作用，其深度参与TCR-β链基因重排和T细胞谱系分化。每个项目获得的结果描述如下。 1）去年，我们在Jα49（170bp）上游区域发现了TCR-α链基因的一个新的分化阶段特异性调控顺式元件。今年，我们从129个小鼠基因组文库中分离出了这个区域，并以此为基础构建了打靶载体，并通过同源重组的方法建立了缺失该区域的小鼠。分析结果，未检测到 TCR-α 链 Jα49-45 片段的基因重排和种系 (GL) 转录。因此，已经清楚，除了增强子之外，分化阶段特异性顺式元件也作用于TCR-α链基因重排中的邻近片段。此外，我们直接证明了之前的 GL 转录对于同一位点的 DNA 重排至关重要。 2）创建了GATA3突变小鼠，其中将与诱导表达的载体缀合的基因引入T细胞和B细胞的所有分化阶段。从这些小鼠培育的小鼠胎儿肝脏、骨髓和脾脏中获取前B细胞和B细胞并进行分析，但与预期相反的是，在小鼠的任何分化阶段都没有观察到TCR-β链基因的重排。没有B细胞谱系。此外，B细胞没有明显减少。 B 细胞分化缺乏显着抑制的一个可能原因是引入的 GATA3 基因表达较弱，因此我们目前正在生成具有不同启动子结合的 GATA3 转导小鼠。