糖鎖を認識する白血球接着分子L-セレクチンの新しいリガンドの解析

L-选择素的新配体分析，L-选择素是一种识别糖链的白细胞粘附分子

基本信息

批准号：
08770236
负责人：
川島博人
金额：
$ 0.64万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08770236/
关键词：
接着分子 L-セレクチンリガンドリンパ節バキュロウイルス

项目摘要

白血球接着分子L-セレクチンと高内皮細静脈(HEV)上のリガンド分子との結合は、リンパ球ホ-ミング現象の特異性の決定に重要である。すでに、リンパ節におけるL-セレクチンのリガンドとしてGlyCAM-1およびCD34が報告されているが、われわれはそれ以外の分子がラットリンパ節に存在する可能性を指摘してきた。本年度はラット可溶性L-セレクチン(LECーIgG)をプローブとして、このリガンドの大量精製を行い、その部分アミノ酸配列の解析を行うとともにその特異性を解析した。はじめに、固相化LEC-IgGーアフィニティーカラムを用いて、ラットリンパ節の組織片の可溶化物から180kDaのリガンド分子(p180)の大量精製を行った。得られた精製標品を用いてN-末端部分アミノ酸配列の解析を行ったところ、ヒトおよびマウスのC型レクチンの一つであるマンノースレセプターと高い相同性を有していた。マンノース-BSAを用いた結合実験から、p180が実際にマンノース特異的なレクチン活性を持つことが明らかとなった。さらに、p180とLEC-IgGの結合はαーメチルマンノシドによって濃度依存的に阻害され、100mMで完全に結合が阻害された。われわれはこれまでバキュロウイルス/かいこ発現系を用いて作製したLEC-IgGをプローブに用いてきたが、この発現系ではオリゴマンノース型の糖鎖付加が起こることが知られており、この糖鎖部分がマンノース特異的なレクチン活性を有するp180によって認識されたものと考えられた。そこで、COSー7細胞を用いた発現系により作製したLEC-IgGとp180の結合を調べたところ、全く結合は見られなかった。これらの結果から、p180とLECーIgGの相互作用はp180側のレクチン活性により担われており、p180はL-セレクチンの生理的なリガンドではないことが示唆された。

白细胞粘附分子L-选择素与高内皮静脉（HEVS）上配体分子的结合对于确定淋巴细胞归因现象的特异性很重要。尽管已经报道了淋巴结中L-选择蛋白的Glycam-1和CD34作为配体，但我们指出了大鼠淋巴结中可能存在其他分子的可能性。今年，我们使用大鼠可溶性L-选择素（LEC-IGG）作为探针进行了大量纯化，并分析了其部分氨基酸序列并分析了其特异性。首先，使用固定的lec-igg-亲和力柱从大鼠淋巴结的组织片段中纯化了大量180 kDa配体分子（P180）。获得的纯化制剂用于分析N末端的氨基酸序列，并发现它与人类和小鼠的C型凝集素之一具有较高的同源性。使用甘露糖-BSA的结合实验表明，P180实际上具有甘露糖特异性的凝集素活性。此外，p180与LEC-IGG的结合被α-甲基曼诺糖苷以浓度依赖性方式抑制，从而完全抑制了100 mm的结合。我们以前已经使用了使用杆状病毒/木ko表达系统产生的LEC-IGG作为探针，但众所周知，在该表达系统中发生了寡糖型糖基化，并且人们认为这种糖基化部分被P180识别为p180，其具有疫霉素 - 特异性粘蛋白活性。因此，当我们研究使用COS-7细胞产生的表达系统产生的LEC-IGG和P180之间的结合时，找不到结合。这些结果表明，P180和LEC-IGG之间的相互作用是通过凝集素活性在P180侧进行的，而P180不是L-蛋白质的生理配体。