半数体精子細胞の分裂を調節するSer/Thrキナーゼ遺伝子haspinの解析

调节单倍体精子细胞分裂的 Ser/Thr 激酶基因 haspin 的分析

• 批准号: 12780555
• 负责人: 田中 宏光
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 2001
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-12780555/
• 关键词: Testis; haploid; Germ Cell; haspin; Cell Cycle; Arrest; human; Intronless; 半数体; 精子細胞; 特異的遺伝子; 細胞分裂; 精巣; 核; キナーゼ; グノム

生殖細胞に特異的な現象を理解するために、精細胞特異的に発現する遺伝子を系統的にクローニング解析してきた。具体的には、正常マウス精巣のcDNAライブラリーから精細胞欠失マウス(W/Wv)精巣cDNAライブラリーを差し引くサブトラクション法により、精細胞特異的遺伝子をクローニングした(FEBS. Lett.,1994)。その中の新規遺伝子haspinは、分子量84KDa, pI8.4のタンパク質をコードし、ロイシンジッパー、核移行シグナル、塩基性領域、プロテインカイネースカタリティックドメインの一部(I, II, III)をもつ。ノーザンブロッテング法、ウエスタンブロッテング法等により精子細胞特異的発現と、精子細胞核での局在が明かとなった。又、精巣の抽出画分を用いた免疫沈降法にり、Haspinが1)Ser/Thr protein kinaseであること。また、2)DNA Cellulose Column ChromatographyによってDNAに結合すること。さらに、3)培養細胞で強制発現させたとき、細胞分裂がG1期で停止することが明かとなった(J. B. C.,1999)。今回、Haspin遺伝子がヒトにも存在すること、また、Haspin遺伝子のKOマウスの作成することができた。今後男性不妊症とHaspin遺伝子変異についてKOマウスの解析を交えて調べてゆきたい。

为了了解细菌特异性现象，我们具有系统的克隆和分析基因，这些基因在精子细胞中特异性表达。具体而言，通过减法法克隆了精子特异性基因，该基因从正常小鼠睾丸的cDNA文库中减去了缺乏精子的小鼠（W/WV）睾丸cDNA库（Febs。Lett。，1994）。新型基因HASPIN编码具有分子量为84 kDa，PI8.4的蛋白质，并具有亮氨酸拉链，核转运信号，基本区域和一部分蛋白激酶催化结构域（I，II，III）。北印迹，蛋白质印迹等揭示了精子细胞特异性表达和精子细胞核中的定位。此外，使用睾丸的提取馏分进行免疫沉淀，haspin必须为1）Ser/Thr蛋白激酶。另外，2）通过DNA纤维素柱色谱与DNA结合。此外，3）揭示了在培养的细胞中进行强制表达时在G1阶段停止的细胞分裂（J. B. C.，1999）。这次，haspin基因存在于人类中，并且有可能用haspin基因创建KO小鼠。将来，我们想研究男性不育症和Haspin基因突变，包括对KO小鼠的分析。

项目成果

Hiromitsu Tanaka: "Cloning and Characterization of human haspin gene encoding haploicl genu cell-specific nuclear protein Kinase"Molecular Human Reproduction. 7・3. 211-218 (2001)

田中宏光：“编码单倍体属细胞特异性核蛋白激酶的人类 haspin 基因的克隆和表征”《分子人类生殖》211-218。

Yasuhide Yoshimura: "Nested genomic structure of haploid germ cell specific haspin gene."Gene. (In press). (2001)

Yasuhide Yoshimura：“单倍体生殖细胞特异性 haspin 基因的嵌套基因组结构。”基因。

Hiromitsu Tanaka: "Cloning and characterization of human haspin gene encoding haploid germ cell-specific nuclear protein kinase."Mol.Hum.Reprod.. Vol.7. 211-218 (2001)

Hiromitsu Tanaka：“编码单倍体生殖细胞特异性核蛋白激酶的人类 haspin 基因的克隆和表征。”Mol.Hum.Reprod.. 第 7 卷。