active repressor domainを利用した転写制御因子の標的の検索

使用活性抑制域搜索转录调节因子的靶标

基本信息

批准号：
09780625
负责人：
片岡浩介
金额：
$ 1.54万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至 1998
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09780625/
关键词：
転写制御転写因子遺伝子発現

项目摘要

転写を積極的に抑制する機能をもついわゆるactive repressor domainを利用して、既知の転写制御因子の標的となる遺伝子を単離するための実験系の確立を試みた。癌遺伝子産物/転写活性化因子Mafと、転写抑制因子Mxilのrepressor domainであるSID(Sin3-interaction domain)とのキメラ蛋白質SID-Mafは、期待されたように強い転写抑制能を示した。さらに、非常に強い転写活性化能を持つVP16 activation domainをMafに結合したキメラ蛋白質VP16-Mafを作製し、これらの転写活性化能とChicken embryo fibroblastにおけるtransformation能とを調べたところ、Mafの転写活性化能とtransformationとのあいだに明確な相関間係があることがわかった。すなわち、Mafの標的遺伝子の発現量は、通常の細胞とMafを強制発現させた細胞との差に比べて、SID-MafおよびVP16-Mafを発現する細胞間の差の方がより顕著であることが期待され、したがって、標的遺伝子を単離する上で有用であると考えられた。実際に標的遺伝子を単離するには既存の技術であるSubtractionやcDNA micro arrayなどを利用することが考えられるので、現在これらのキメラMaf蛋白質を恒常的に発現している細胞の確立を進めている。また、これらのキメラMaf蛋白質の発現のON/OFFをコントロールできる系ができればMafの1次標的遺伝子のみを効率よく単離できるであろうと考えられるので、これも同時に試みている。本研究で試みたSIDおよびVP16といった転写制御domainを利用する系は、モデルとして用いたMaf以外の転写因子についてもその標的遺伝子を単離する上で一般的に応用可能かつ有用である。

我们试图建立一个实验系统，使用所谓的主动抑制域（具有主动抑制转录的功能）来分离已知转录调节因子的靶标基因。 SID-Maf是一种由癌基因产物/转录激活子Maf和SID（Sin3相互作用结构域）组成的嵌合蛋白，SID是转录抑制子Mxil的抑制子结构域，正如预期的那样，显示出强大的转录抑制能力。此外，我们还创建了一种嵌合蛋白VP16-Maf，其中具有非常强的转录激活能力的VP16激活结构域与Maf连接，并检查了它们在鸡胚成纤维细胞中的转录激活能力和转化能力。激活能力和转化之间存在明显的相关性。换言之，表达SID-Maf和VP16-Maf的细胞之间的Maf靶基因的表达水平的差异比正常细胞和强制表达Maf的细胞之间更显着，因此预期该方法将是有用的。分离靶基因。为了真正分离靶基因，可以使用现有的技术，例如减法和cDNA微阵列，因此我们目前正在致力于建立组成型表达这些嵌合Maf蛋白的细胞。此外，如果我们能够创建一个可以控制这些嵌合Maf蛋白的ON/OFF表达的系统，我们将能够有效地仅分离Maf的主要靶基因，所以我们也在同时尝试这样做。本研究中测试的使用 SID 和 VP16 等转录控制域的系统普遍适用，可用于分离除 Maf 以外的转录因子的靶基因（Maf 用作模型）。