Study on the prevention mechanism of food factors against impaired cognition

食物因素对认知障碍的预防机制研究

基本信息

批准号：
22KF0289
负责人：
松井利郎
金额：
$ 1.41万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2023
资助国家：
日本
起止时间：
2023-03-08 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22KF0289/
关键词：
認知症神経細胞食品因子

项目摘要

認知改善に働く食品成分を究明し、その発現機構を明示するため、神経細胞を用いた評価系の構築を行った。本年度は、この達成のために、マウス神経幹細胞NE-4C（passage 6 ~ 7）を用いて、分化誘導因子としてレチノイン酸刺激を4日間実施し、神経細胞へと分化させた神経細胞を種々の実験に供した。本細胞での抗認知作用を示す生理活性ペプチドTyr-Proのアセチルコリン系亢進作用とその作用機構を明らかにするためには、本系の中心となるアセチルコリン量を定量的に評価する必要がある。そこで、LC-TOF/MS分析法による直接的なアセチルコリン量測定系の構築を図った。誘導化することなく低分子かつ高極性のアセチルコリン（146.1176 m/z）をイオン化検出するため、ミックスイオンモードのLCカラムであるImtakt Scherzo SS-C18が最適であることを突き止め、さらにアセトニトリル系溶離液へのイオン対試薬であるギ酸アンモニウム（50 mM)添加が有効であること、内標準としてアセチルコリン-d4（150.1523 m/z)を用いた定量分析が最良であるとの結果を得た。本MS分析系の確立によって、溶液中のアセチルコリン量を1 nM濃度以上で定量可能となった。そこで、20 microMのTyr-ProをNE-4C細胞に添加し、48時間培養後の細胞破砕液を用いて定量分析を行った結果（タンパク質料で補正）、1.5倍のアセチルコリン産生量の有意な増大（P < 0.01）が認められた。以上の結果、当該ペプチドは神経細胞でのアセチルコリン系の賦活に直接的に関わっていることが明らかとなった。

为了研究有助于改善认知的食物成分并阐明其表达机制，我们构建了一个利用神经元的评估系统。为了实现这个目标，今年我们使用小鼠神经干细胞NE-4C（第6至7代），用视黄酸作为分化诱导剂刺激其4天，并以多种方式诱导神经元分化为神经元它被用于实验。为了阐明在该细胞中表现出抗认知作用的生物活性肽Tyr-Pro的乙酰胆碱系统增强作用及其作用机制，有必要定量评估该系统的核心乙酰胆碱的量。因此，我们尝试使用 LC-TOF/MS 分析构建直接乙酰胆碱测量系统。为了在不衍生化的情况下电离并检测低分子和高极性乙酰胆碱 (146.1176 m/z)，我们发现混合离子模式 LC 柱 Imtakt Scherzo SS-C18 是最佳选择，并且还使用乙腈基洗脱液添加甲酸铵 (50 mM)，一种离子对试剂。结果表明，使用m/z）进行定量分析效果最好。通过建立该MS分析系统，可以对溶液中浓度为1nM以上的乙酰胆碱进行定量。因此，我们向NE-4C细胞中添加20μM Tyr-Pro，并使用培养48小时后的细胞裂解液进行定量分析（用蛋白质材料校正），结果发现乙酰胆碱的产生量增加了1.5倍。观察到增加（P<0.01）。上述结果表明，该肽直接参与神经细胞乙酰胆碱系统的激活。