Study on the prevention mechanism of food factors against impaired cognition

食物因素对认知障碍的预防机制研究

基本信息

批准号：
22KF0289
负责人：
松井利郎
金额：
$ 1.41万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2023
资助国家：
日本
起止时间：
2023-03-08 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22KF0289/
关键词：
認知症神経細胞食品因子

项目摘要

認知改善に働く食品成分を究明し、その発現機構を明示するため、神経細胞を用いた評価系の構築を行った。本年度は、この達成のために、マウス神経幹細胞NE-4C（passage 6 ~ 7）を用いて、分化誘導因子としてレチノイン酸刺激を4日間実施し、神経細胞へと分化させた神経細胞を種々の実験に供した。本細胞での抗認知作用を示す生理活性ペプチドTyr-Proのアセチルコリン系亢進作用とその作用機構を明らかにするためには、本系の中心となるアセチルコリン量を定量的に評価する必要がある。そこで、LC-TOF/MS分析法による直接的なアセチルコリン量測定系の構築を図った。誘導化することなく低分子かつ高極性のアセチルコリン（146.1176 m/z）をイオン化検出するため、ミックスイオンモードのLCカラムであるImtakt Scherzo SS-C18が最適であることを突き止め、さらにアセトニトリル系溶離液へのイオン対試薬であるギ酸アンモニウム（50 mM)添加が有効であること、内標準としてアセチルコリン-d4（150.1523 m/z)を用いた定量分析が最良であるとの結果を得た。本MS分析系の確立によって、溶液中のアセチルコリン量を1 nM濃度以上で定量可能となった。そこで、20 microMのTyr-ProをNE-4C細胞に添加し、48時間培養後の細胞破砕液を用いて定量分析を行った結果（タンパク質料で補正）、1.5倍のアセチルコリン産生量の有意な増大（P < 0.01）が認められた。以上の結果、当該ペプチドは神経細胞でのアセチルコリン系の賦活に直接的に関わっていることが明らかとなった。

为了调查用于改善认知并清楚地显示其表达机制的食物成分，我们使用神经元构建了评估系统。为了实现这一目标，使用小鼠神经干细胞NE-4C（第6-7个传递）进行了视黄酸刺激作为分化诱导因子，并将分化为神经元分化为神经元的神经元进行了各种实验。为了阐明生物活性肽Tyr-Pro的乙酰胆碱系统的基于乙酰胆碱的多动症和机制，该系统在该细胞中表现出抗认知作用，有必要定量评估乙酰胆碱含量，这是该系统的中心。因此，我们尝试使用LC-TOF/MS分析来构建直接的乙酰胆碱剂量测量系统。 In order to detect small molecule, highly polar acetylcholine (146.1176 m/z) without derivatization, we found that Imtakt Scherzo SS-C18, a mixed ion mode LC column, is optimal, and we also found that adding ammonium formate (50 mM) as an ion pair reagent to the acetonitrile-based eluent is effective, and quantitative analysis using acetylcholine-d4 （150.1523 m/z）作为内标是最好的。通过建立此MS分析系统，可以在1 nm或更高的浓度下确定溶液中的乙酰胆碱量。因此，将20 microm tyr-Pro添加到NE-4C细胞中，并在培养后使用细胞裂解物进行48小时（用蛋白质含量校正）进行定量分析，并观察到乙酰胆碱的产生量显着增加1.5倍。由于上述结果，已经揭示了肽直接参与神经元中乙酰胆碱系统的激活。