プラステイン反応を利用した血圧低下ペプチドの連続合成

利用plastein反应连续合成降血压肽

• 批准号: 15658045
• 负责人: 松井 利郎
• 金额: $ 2.05万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15658045/
• 关键词: 血圧低下ペプチド; ペプチド合成; プラステイン反応; 高血圧

化学合成されたペプチドの降圧食品素材への適用が不可能な現状で、当該保健食品の開発・研究はすべて天然蛋白質からの酵素分解を主体としている。そこで本研究では、従来の研究アプローチとは全く逆の過程、すなわち加水分解酵素の逆合成反応を利用した天然アミノ酸からの活性ペプチドの連続生産を目指した。本年度においては、最適加水分解酵素のプラステイン反応性(脱水縮合によるペプチド合成反応)に関わる合成条件(酵素剤の選択、反応条件、添加剤)を明らかにした。アミノ酸として、Val, Tyrを選択し、酵素としてthermolysin及びcarboxypeptidase Aを用いて、以下の合成条件で反応を実施した、5mM AA : enzyme/0.1M phos.buffer(pH5-8)-酢酸エチル(1:1),反応停止0.1%TFA。反応生成物の検出は逆相HPLC(5%-35%CH3CN/0.1%TFA)法により行った。その結果、1)themolysinによるVY合成:pHの影響は顕著であり、pH44-6の範囲においてのみ合成が認められた。pH5.0,反応時間24h、5mM CaCl2存在下において、0.1%シュガーエステルの添加によって約3倍の合成量の増大が認められた(1352nM)。2)50℃の条件で反応は促進され、合成速度は40pmol/ml/hと見積もられた。3)Carboxypeptidase Aの場合においては、0.5%グリセロール添加によって反応は促進され、24時間の反応によって2936nmol/lの合成が認められた。4)pH9.0,37℃、1.0%グリセロール添加の条件において、合成速度は、30nmol/ml/hと見積もられた。以上の結果、両酵素を併用することによって、より高い合成収率を得ることが可能であると推察され、溶媒-水(海面活性剤添加)混合系が反応促進に有用であることが判明した。

在当前的情况下，不可能将化学合成的肽应用于降低食品成分，所有关于健康食品的开发和研究主要基于自然蛋白质的酶促降解。因此，在这项研究中，我们旨在使用常规研究方法的完全相反的过程从天然氨基酸中连续产生活性肽：水解酶的反向合成反应。今年，阐明了与最佳水解酶反应（通过脱水凝结的肽合成反应）相关的合成条件（酶剂，反应条件，添加剂的选择）。将Val和Tyr作为氨基酸选择，并在以下合成条件下使用热溶素和羧肽酶A为酶在以下合成条件下进行反应。通过反向的HPLC（5％-35％CH3CN/0.1％TFA）检测到反应产物。结果，1）通过themolysin的Vy合成：pH的作用显着，仅在44-6的pH范围内观察到合成。在存在pH 5.0，反应时间24H和5mm CaCl2的情况下，添加0.1％的糖酯的合成含量量增加了大约3次（1352nm）。 2）在50°C的条件下加速反应，估计合成速率为40 pmol/ml/h。 3）在羧肽酶A的情况下，通过添加0.5％甘油加速反应，观察到2936 Nmol/L可以通过反应合成24小时。 4）在pH 9.0、37°C​​的条件下，估计合成速率为30 nmol/ml/h，添加1.0％。结果，据估计，通过将这两种酶一起使用，可以获得更高的合成产率，并且发现混合溶剂 - 水（添加了海面表面活性剂）系统对促进反应很有用。