運動ニューロン前駆細胞の株化

运动神经元祖细胞系的建立

基本信息

批准号：
09878181
负责人：
田中英明
金额：
$ 1.15万
依托单位：
Kumamoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-09878181/
关键词：
運動ニューロン前駆細胞 P53 神経管ヘッジホッグ蛋白質

项目摘要

神経細胞を分子細胞レベルで研究するためには、細胞株が存在すれば大変に便利である。しかし、神経細胞は分化後は細胞分裂しないという特徴を持つため、神経細胞の細胞株として知られるニューロブラストーマやPC12細胞では、神経細胞としての多くの性質が失われてしまっている。この研究計画では、神経細胞そのものではなく、その前駆細胞を株化することを試みた。P53癌抑制蛋白質の遺伝子欠損マウスの由来の細胞は、細胞周期の制御が異常であり、突然変異を生じやすいことから細胞株が得られやすいとされている。P53遺伝子欠損マウス胎仔(E8-9)から脊髄レベルの神経管を取り出し、単一細胞に単離後、FGF、EGFなどの細胞成長因子を添加した血清不含有培養液で継代培養した。その結果、継代培養後も増殖を続ける細胞が得られた。この様な細胞は、通常の神経管細胞の培養では見出せない。次に、これらの細胞が神経細胞への分化能力を持つ細胞であるかどうかを調べるために、神経管細胞を運動ニューロンに分化させる効果を持つヘッジホッグ蛋白質を発現する細胞株の上清を培養液に加えた。しかし、この状態では神経細胞が出現せず、これまでのところ得られた継代培養が可能な細胞集団が神経前駆細胞であるかどうか決定し得ないでいる。

细胞系的存在对于在分子和细胞水平上研究神经细胞极为方便。然而，由于神经细胞具有分化后不分裂的特性，神经母细胞瘤和被称为神经细胞系的PC12细胞失去了许多作为神经细胞的特性。在这个研究项目中，我们试图建立一个不是神经细胞本身而是它们的前体细胞的细胞系。缺乏P53抑癌蛋白基因的小鼠来源的细胞具有异常的细胞周期控制，并且容易发生突变，因此很容易获得细胞系。从 P53 基因缺陷小鼠胎儿 (E8-9) 中取出脊髓水平的神经管，分离成单细胞，并在补充有 FGF 和 EGF 等细胞生长因子的无血清培养基中传代培养。结果，获得了即使在传代培养后仍继续增殖的细胞。在正常的神经管细胞培养物中找不到此类细胞。接下来，为了检查这些细胞是否具有分化为神经元的能力，我们培养了表达刺猬蛋白的细胞系的上清液，该蛋白具有将神经管细胞分化为运动神经元的作用，添加到液体中。然而，在这种状态下，神经元并未出现，并且迄今为止还无法确定获得的可传代培养的细胞群是否是神经祖细胞。