Regulatory Mechanisms of Granulomatous Inflammation Focusing on Post-translational Modifications

以翻译后修饰为重点的肉芽肿性炎症调节机制

• 批准号: 22K08380
• 负责人: 神戸 直智
• 金额: $ 2.58万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K08380/
• 关键词: 肉芽腫; 自己炎症; ブラウ症候群; 翻訳後修飾; ユビキチン化; NOD2

感染症のみならず，変性した自己や代謝産物に対しても形成される免疫反応である肉芽腫のメカニズムには不明点が多い。我々は，細胞内パターン認識受容体であるNOD2遺伝子に変異を有することで自己炎症的機序により，皮膚と関節，眼に肉芽腫をきたすブラウ症候群の解析に従事してきた経験から，このブラウ症候群をモデル疾患として捉えた肉芽腫のメカニズム解明に取り組んでいる。リン酸化以外の翻訳後修飾として近年蛋白の精度管理を超えて注目されるユビキチン化に着目した本研究においては，まずブラウ症候群から同定されるNOD2変異体の病的意義を評価するために，我々はFLAG標識をしたNOD2をHEK293細胞へと遺伝子導入し，ルシフェラーゼ活性を指標にNF-κBの転写亢進能を評価してきた実験系を用いて，ここにHA標識をしたユビキチンを同時に遺伝子導入することで，変異NOD2によって誘導されるユビキチン鎖の同定を試みた。この際，NLR分子の活性化にはK63が関わると推定されることから，HA標識をしたWTユビキチン，K63のみを残し他の残基をアルギニンに置換したユビキチン（Ub-K63），コントロールとしてUb-K48など他のLys残基を１つずつ残したものを遺伝子導入系に導入し，抗HA抗体を用いてユビキチン鎖の形成の有無を確認したが，残念ながらNOD2の変異の有無，およびNOD2のリガンドであるMDPの有無によって形成されるユビキチン鎖に変化は見られなかった。さらに，NOD2の下流でシグナル伝達に関わることが同定されているRIPK2を標的蛋白として，RIPK2の関わるユビキチン形成についても検討したが，この際もNOD2変異の有無による差異は確認できていない。

肉芽肿的机制尚有许多未知之处，肉芽肿是一种免疫反应，不仅发生于传染病，还发生于退化的自身和代谢物。根据我们对 Blau 综合征（一种细胞内模式识别受体 NOD2 基因突变，由于自身炎症机制导致皮肤、关节和眼睛出现肉芽肿）的分析经验，我们正在努力阐明肉芽肿的机制，将其用作模型疾病。在这项研究中，我们重点关注泛素化，这是一种除磷酸化之外的翻译后修饰，近年来除了将 FLAG 标记的 NOD2 转化为 HEK2 之外，还受到了人们的关注。使用将基因导入93个细胞并以荧光素酶活性为指标评价NF-κB转录增强能力的实验系统，通过同时将HA标记的泛素导入这些细胞，可以增强NF-κB转录的能力。我们试图鉴定与 NOD2 突变体相关的泛素链。此时，由于推测K63参与了NLR分子的激活，因此我们使用HA标记的WT泛素、只剩下K63而其他残基被精氨酸取代的泛素（Ub-K63）以及Ub-K63作为对照-1 其他赖氨酸残基，例如 K48我们将剩余的每条泛素链引入基因转移系统，并使用抗HA抗体来检查泛素链的形成，但不幸的是，泛素链的形成取决于NOD2突变的存在与否以及NOD2突变的存在。或缺乏 MDP（NOD2 的配体） 在泛素链中未观察到任何变化。此外，我们研究了涉及 RIPK2 的泛素形成，以 RIPK2 为靶点，RIPK2 已被确定参与 NOD2 下游的信号转导，但我们无法根据 NOD2 突变的存在或不存在来确认任何差异。

项目成果

診断力を磨こう 診断困難例の診断プロセスに学ぶ 自己炎症を疑う場合

提高诊断技能：从疑难病例的诊断过程中学习当您怀疑自身炎症时

• 发表时间: 2022
• 作者: 神戸直智

Incomplete penetrance of NOD2 C483W mutation underlining Blau syndrome

NOD2 C483W 突变的不完全外显导致布劳综合征

• DOI: 10.1186/s12969-022-00743-1
• 发表时间: 2022-10-03
• 影响因子: 2.5
• 作者: Chang, Shao-Yu;Kambe, Naotomo;Fan, Wen-Lang;Huang, Jing-Long;Lee, Wen-, I;Wu, Chao-Yi
• 通讯作者: Wu, Chao-Yi

Chang Gung University(その他の国・地域)

长庚大学（其他国家/地区）

Potential benefits of TNF targeting therapy in Blau syndrome, a NOD2-associated systemic autoinflammatory granulomatosis.

TNF 靶向治疗对 Blau 综合征（一种 NOD2 相关的系统性自身炎症肉芽肿病）的潜在益处。

• DOI: 10.3389/fimmu.2022.895765
• 发表时间: 2022
• 影响因子: 7.3
• 作者: Matsuda T; Kambe N; Takimoto
• 通讯作者: Takimoto